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培养基模拟灌装试验 资料编制：百万个为什么 未经同意，切勿转载，内容未经确认，存在错误 为什么要做培养基模拟灌装验证 1：无菌药品附录规定？ 2011年第16号令GMP附录1无菌药品-第十章 2：证明现有工艺无菌保障？ 3：模拟现有产品，挑战性实验？2012年制药工艺验证实施手册第工艺模拟试验第290页 思考： 无菌检查的局限性 无菌的概念 什么是无菌? 理论上：无菌＝没有任何活的微生物 实际上：我们无法证明产品中没有活微生物存在 无菌的概念 2003验证指南-第三章-第二节-219页 “无菌”的实际定义: 经生长和繁殖证明无生物 实际为概率上的无菌，普遍接受的标准是： 最终灭菌无菌制剂：微生物存活的概率达到＜10-6（如何理解）。 非最终灭菌无菌制剂：目标是零生长，但在污染率低于0.1%，可信度在95%时是可以接受的。 百万分之一的问题 有人曾经提出这样的问题，说既然最终灭菌产品的无菌达到百万分之一的污染概率即予认可，那么，当生产一百万瓶时或超出一百万批时，就允许有污染的产品了。这与无菌定义是否矛盾。 从灭菌角度上看，当最终灭菌使污染达到低于百万分之一概率时，产品已具备了足够的安全性，产品是事实上的无菌。（生物指示剂） 一批产品污染菌存货概率是否适用于整个批？ 百万分之一的问题 百万分之一的问题 百万分之一的结果 是一种对数规则说明微生物存活的概率，低于百万分之一认为达到无菌（灭菌柜确认中的生物指示剂） 一瓶的检验结果代表一批，应具备相同的污染率及相同的灭菌处理。（相同污染率是生产工艺控制、相同的灭菌处理是灭菌柜确认）。所以，无菌检查不能采用复检。 培养基模拟灌装，完美的解决了无菌检查复检问题，因为它是全部无菌检查。更能体现污染率问题。 至于非终端灭菌工艺，SAL不得低于千分之一。可信限为95%，这样就以灌装数量、污染率、可信限等判断非终端灭菌工艺是否达到要求。 如何理解可信限？ 95%置信度?? 无菌检查的局限性研究：1：二项展开式；2：泊松分布；3：排列组合法。 例子1:一批产品10%染菌，从中取1个样做无菌检查，取到无菌样的概率p为0.9，取到染菌样概率q为0.1。于是有公式：（p+q)1=1.0。 例子2：一批产品10%染菌，从中取2个样做无菌检查，取到2个无菌样的概率p*p为0.81，取到2个染菌样概率q*q为0.01。取到一个无菌一个染菌概率为：p*q+q*p为0.18。于是有公式：（p+q)2=1.0。 推算公式：（p+q)n=1.0。 结论：相同染菌率的情况下，取样数越多，通过无菌检查的概率就越低（检出概率越高）。当取样数足够多，直到被检出的概率达到95%，即置信度。 污染率不得大于0.1%？？ 源头：WHO GMP1992 无菌附录第17.40条 置信度为95%条件下，无菌灌装产品允许的染菌水平不得大于0.1%。 延伸：通过无菌检查的概率：pn 检出染菌的概率：1-pn = 1-（1-q）n （不考虑假阳性） 即：检出染菌概率为95%=1-（1-0.001）n 计算结果n=3000 如何将取样数扩大到几千？培养基模拟试验就是一个非常特殊的生产，每个产品都是取样的样品。即批量即取样量。 如何确定试验批量 批量即取样量，批量的数值影响允许污染的数量 超出允许染菌的数量，则试验失败。即无菌保障存在严重缺陷。 批量选择参考GMP指南描述：实际产品批量、无菌附录要求、干扰因素进行决定。 C车间：产品批量大于3000，工艺非人工灌装，采用隔离无菌灌装机，污染率较小。验证批量可减少，但不低于5000支。 如何确定试验批量 验证批量 条件1 条件2 试验前的准备工作 人员无菌装配及无菌更衣、无菌操作已培训（首次后，应在验证前确认是否存在人员变更，尤其是B级操作、取样及QC人员） 系统、设施运行良好，已排除设备故障 系统、设施已验证或确认 培养基模拟灌装验证方案已确定 验证方案所需物料、标示、器具已具备 验证方案所需SOP已确定 验证方案所需记录已具备 培养基灌装的原则 验证实施手册290页 通常情况下，应该包括产品实际操作过程中可能发生的“最差条件” 必须考虑可能采取那些干预措施 ? 最差条件 高于或低于正常范围的条件限度，与正常生产条件相比更有可能造成工艺或生产失败的条件。 如果某些做法会带来污染的风险，则不允许用培养基灌封的结果为它的不合理的进行辩护。 包括但不限于：1：延长产品或部件的无菌保持时间2：增加无菌室的人员数量3：生产过程中，不使用抑制或保护剂，如氮气等。 关键因素 起始步骤 验证的次数和频率 培养基及培