流式细胞仪的原理与应用2[精品].ppt

* * * 比如说：目前很多抗癌药物的生产都是通过药物诱导癌细胞发生凋亡来实现抗癌目的的。 通过一定的检测手段，比如流式细胞仪，来检测用药以后是否能促进癌细胞的凋亡，来确定此药是否具有抗癌效果 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 这是FACSCalibur流式细胞仪的光路图，这里先说一下我们所就是这个机型，它是双激光四色分析系统，也就是说这台机子配备了两根不同的激光作为激发光源从而实现4个荧光参数的分析，FL1-4,通常指的是FITC,PE,PerCP,APC四色荧光。 下面看一下光路图，这是488nm的蓝色激光，然后还有一个是635nm的红色激光，经过聚焦透镜聚焦整形后的光束，垂直照射在样品流上，也就是图上的flow cell, 被荧光染色的细胞在激光束的照射下，产生散射光和激发荧光。我们看一下，前向角光散射信号在前向小角度进行检测，?这种信号基本上反映了细胞体积的大小；荧光信号和侧向角光散射信号的接受方向与激光束垂直，我们看一下，经过一系列双色性反射镜和带通滤光片的分离，得到ssc和多个不同波长的荧光信号。 ? * 我简单给大家介绍一下激光 (Laser)，荧光素与荧光，FACS检测的信号参数 * 激光，是一种相干光源，它能提供单波长、高强度及稳定性高的光照，他的单色性好，方向性好，亮度高，是细胞微弱荧光快速分析的理想光源，这是因为由于细胞的快速流动，每个细胞经过光照区的时间仅为１微秒左右，每个细胞所携带荧光物质被激发出的荧光信号强弱，与被照射的时间和激发光的强度有关，因此细胞必须达到足够的光照强度。 目前流式细胞仪上配的比较多是激光波长是488nm, 635nm * * 流式上经常使用的 * * * * * * * * * * 这是用CD3-FITC和CD19-PE对外周血进行双色直接染色后行流式细胞仪分析后得到的散点图。 从这个散点图上我们也可以看到我们检测的一大群细胞里主要有三小群细胞，看图上，通常我们把左下脚的认为是双阴性的细胞群，双阴性细胞群的位置在流式细胞仪里我们是通过设十字门来确定的，而十字门的位置则是通过同型抗体确定的。十字门的位置一确定，我们就可以把双阴性、双阳性和单阳性的细胞群的位置确定了。在图上，我们可以看到 * 以上我们讲了流式细胞仪可检测到的各种细胞参数 * * * * 目前公认的最佳图像处理系统,使流式细胞仪的功能发挥更加完美。 * * * * * * 流式细胞计的分选功能是由细胞分选器来完成的。总的过程是：由喷嘴射出的液柱被分割成一连串的小水滴，根据选定的某个参数由逻辑电路判明是否将被分选，而后由充电电路对选定细胞液滴充电，带电液滴携带细胞通过静电场而发生偏转，落入收集器中；其它液体被当作废液抽吸掉 某些类型的仪器也有采用捕获管来进行分选的。 * * FC500 该机型优点： 单激光可进行5色检测 文件均可转换成WORD或PDF文档，便于应用 * * * * 细胞因子是可溶性蛋白，在淋巴细胞免疫功能调节方面发挥重要作用。细胞因子可以调节多种细胞的生长、分化，调节正常与病理状态下的免疫应答。研究生理或病理免疫调节因素所致细胞合成的应答与改变，是研究疾病病因与免疫状态的重要工具。 * 细胞活化及细胞因子的检测 * 细胞因子 * * 血栓性疾病、出血性疾病、心血管疾病以及自身免 疫性血小板减少症等疾病的病理生理过程与血小板相关。 血小板功能检测包括黏附、聚集和活化功能试验。使用 流式细胞仪检测全血中血小板表面相关标志物是一种新 技术，它拓宽了血小板相关疾病的诊断与功能研究方法， 丰富了血小板功能评估指标。 5、流式细胞术分析血小板 血小板活化 血小板活化试验，对于血小板功能、心血管疾病的研究，有重要意义。使用流式细胞仪进行多参数分析，可以特异灵敏地检测血小板表面标记，了解血小板的活化状态和反应性，并同时获得更多关于血小板的信息。在疾病监测、抗血小板治疗病人的筛选及治疗监测、预测并发症等方面有良好的应用前景。 IIb/IIIa复合物（CD41/CD61）在所有静止和活化的血小板上都有表达 血小板活化时发生的改变 IIb/IIIa复合物发生变构，表达PAC-1 血小板内颗粒释放，分泌促进凝血反应的物质，这时，表达CD62P * * 血小板活化 使用流式细胞仪，同时分析血小板多个活化指标（PAC-1/CD62P/CD61），灵敏、特异地检测全血中的血小板，了解血小板的反应性和活化进程 血小板表面膜糖蛋白（GP）：PAC-1 颗粒膜GP的表达量变化：CD62P 直接使用全血，样本更接近生理状况 操作步骤简便、用血量少、避免体外活化与血小板亚群丢失 血小板减少患者也能精