2017湖南省新田县高三生物二轮复习 专题8 第2讲 微生物的培养与应用学案.docVIP

第2讲 微生物的培养与应用 考点一 微生物的实验室培养 一、基础知识 1、培养基 （1）营养组成：一般都含有 碳源 、 氮源 、 水 和 无机盐 。 （2）种类：按物理状态分有 固体 培养基（琼脂的作用:作 凝固剂 ）和 液体 培养基； 按功能或用途分有 选择 培养基和 鉴别 培养基。 （3）培养乳酸杆菌时需要添加 维生素 ，培养霉菌时需要将培养基pH调为 酸性 ； 培养细菌时需要将pH调为 中性或微碱性 ，培养厌氧微生物时则需要提供 无氧 条件。 2、无菌技术： （1）无菌技术的目的是 获得纯净培养物 ，此外还可以防止 感染实验操作者 。 获得纯净培养物的关键是 防止外来杂菌的入侵 ；使用后的培养基丢弃前一定要 灭菌 处理。 （2）无菌技术主要通过 消毒 和 灭菌 来避免杂菌的污染。 常用的消毒方法有：煮沸消毒、巴氏消毒、紫外线消毒、化学药剂消毒 。 灭菌的方法：（1）接种环、接种针等接种用具用 灼烧 灭菌，所用器具是 酒精灯 ； （2）玻璃器皿、金属用具可使用 干热 灭菌法，所用器械是 干热灭菌箱 ； （3）培养基、无菌水等使用 高压蒸汽 灭菌法，所用器械是 高压蒸汽灭菌锅 ； 二、大肠杆菌的纯化培养：可分成 制备培养基 和 纯化大肠杆菌 两个阶段。 1、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 （1）操作步骤： 计算 → 称量 → 溶化 → 灭菌 → 倒平板 。 〖思考1〗在称量操作中，动作要迅速，主要是为了防止 防止牛肉膏吸收空气中水分 。 〖思考2〗溶化操作中需要不断用玻璃棒搅拌的目的是防止 琼脂糊底而导致烧杯破裂 。 （2）倒平板操作：待培养基冷却至 50 ℃左右时在 酒精灯火焰 附近进行操作。 2、纯化大肠杆菌 接种微生物常用的方法有 平板划线法 和 稀释涂布平板法，接种工具分别是 接种环 和 涂布器。接种前接种工具都应先 燃烧 灭菌，且待冷却后才接种操作的目的是 以免温度太高，杀死菌种 。 平板冷凝后，要将平板倒置。 每次划线之前都要灼烧接种环 〖思考5〗划线操作结束时仍需灼烧接种环的目的是 避免接种环上的细菌污染环境和感染操作者 。 。 筛选的原理：人为提供有利于生长的条件，同时其他微生物生长。为了保证结果准确，选择菌落数在的平板进行计数排除培养基是否被污染 1、土壤取样先，。 2微生物的与观察 4、鉴定：在以尿素为唯一氮源的培养基中加酚红 指示剂变 红 色。 ※ 统计细菌数目的其它方法: 滤膜法 ，将大肠杆菌接种到 伊红美蓝 培养基中菌落呈 黑 色。 考点三 分解纤维素微生物的分离 一、基础知识： 1、纤维素酶是一种 复合酶 ，它至少包括三种组分：C1酶、CX酶 和 葡萄糖苷酶 。 2、纤维素分解菌的筛选 （1）方法： 刚果红 染色法。 （2）原理：刚果红（CR）可以与纤维素形成 红色复合物 ，但并不与被 纤维素酶 分解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。当培养基中的纤维素被分解后，会出现以 纤维素分解菌 为中心的 透明圈 ，我们可以通过是否产生 透明圈 来筛选纤维素分解菌。 ※ 方法一：先培养微生物，再用刚果红染色；【加入NaCl溶液的作用是将结合不牢固的刚果红洗去】 方法二：在倒平板时就加刚果红染色。 二、实验设计 〖思考1〗选择培养的目的 增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离到所需的微生物 。 〖思考2〗选择培养的操作是：将培养瓶固定在摇床上 振荡培养 ，直至培养液变 混浊 。 〖思考3〗为什么选择培养能够“浓缩”所需的微生物？ 答：因为只有能适应这种营养条件的微生物才能繁殖，而微生物的繁殖被抑制。 1、某实验小组欲从豆油污染的土壤中筛选出能高效降解脂肪的菌株。请回答： （1）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以 为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于 培养基。 （2）为避免培养皿污染，需将培养皿呈 状态放置。为避免培养液中菌体浓度过高，需将培养液进行 处理。为了排除 ，需设置接种等量 的培养基作为空白对照。 （3）为了筛选出菌株，可将适量的 试剂滴加在平板中的菌落周围，洗去浮色后，如果菌落周围的现象是 ，则说明此种菌能够分泌脂肪酶。 （4）纯化菌种。 每生物兴趣小组为了探究土壤中的微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能高效降解尿素的细菌（目的菌）．培养基成分如下表所示，实验步骤表格所示．请分析回答问题： KH2PO4 1.4g Na2HPO