生物化学的分离纯化复习课程知识讲稿.pptVIP

Zhejiang Provincial Key Lab of Medical Genetics 回收率 为提高DNA片段的回收率，可通过提高DNA样品的上样量和选择适宜的方法与材料而实现。 2. 纯度 常用的纯化方法包括有机溶剂抽提法与商品化的柱层析法（column chromatography）。 柱层析法采用的是阴离子交换层析的原理 从琼脂糖凝胶中回收DNA片段 从琼脂糖凝胶中纯化DNA片段的方法主要有 二乙基氨基乙基（diethyl aminoethyl，DEAE）-纤维素（cellulose）膜插片电泳法 电泳洗脱法（透析袋及非透析袋电泳洗脱法） 冷冻挤压法 低熔点琼脂糖凝胶挖块回收法等。 从聚丙烯酰胺凝胶回收DNA片段 从聚丙烯酰胺凝胶中回收DNA的标准方法是压碎与浸泡法。它是将含待回收DNA条带的凝胶块切出，用吸头或接种针将其压碎，然后以洗脱缓冲液浸泡，使DNA洗脱出来。 该方法能很好地回收小于1 kb的ss或ds-DNA，依分子量不同，其回收率从小于30%至大于90%不等。回收的DNA纯度极高，无酶抑制剂，也无对转染细胞或微注射细胞有毒的污染物，虽费时但操作简单，是小片段DNA回收的较好方法。 质粒DNA的提取与纯化 质粒DNA的提取与纯化的经典方法包括： 碱裂解法 煮沸裂解法 SDS裂解法等 这些方法主要由质粒DNA的扩增、