iCycler iQ荧光定量PCR仪装机几点注意事项.docVIP

iCycler iQ装机和升级的几点注意事项 配套电脑的设置 并口输出模式：iCycler iQ的optical module与配套电脑连接通过并口。要求在电脑启动后进入Bios设置，在并口输出模式（parallel port mode）一栏中选择EPP。 语言和显示器设置：在“控制面板”下，“语言”选项内，将语言首选项选择为英语。显示器的分辨率设置为1024*768，屏幕保护程序设置为“无”。 在启动Icycler软件之前，关闭“防病毒”“金山词霸”等实时软件。 Mask与Purdy： 将iCycler安装完以后，必须进行Mask（对光路）和Purdy（纯染料校正）调节后才能进入使用状态。 Mask Mask的目的是将96个检测点的位置与96个反应孔的位置一一对应，保证荧光收集的准确性。步骤如下： 取iCycler iQ Solution Kit(170-8792)中的External Well Factor Solution（10×）一支（棕色管盖），吸取液体0.5ml，放入一个至少5ml的干净试管中，再加入4.5ml蒸馏水，充分混匀备用。 取iCycler iQ PCR Plates（223-9441）一块，在其96个孔中各加入稀释好的External Well Factor Solution（1×）50μl。 加样后，在板上盖一块干净的光学级封带（Optical-quality sealing tape，223-9444），用刮板刮几下，使封胶与板粘紧。这块准备完的板就叫做External Well Factor Plate 。 将External Well Factor Plate 放入机器，盖好盖。打开系统软件，进入“Run- time central”中的Imaging Services窗口； 点击“Optimize Bias”使荧光信号探测器进入最佳工作位置。完成后“Bias”文件框会显示其调整值，再点击该文件框下方的“Save Bias”键保存其设置； 点击窗口右下方的“Home Filters”键使滤光镜组归回原位； 在“Position Filters”文件框中选择要使用的滤光镜组在选择转轮上的位置选项（一般选择2，既FAM滤光片），在“Select Exposure”文件框中选择适当的曝光长度（一般选择640ms，“count” 文件框选择“1”）； 点击“Make an Exposure”键。窗口左上方会显示出一幅反应板图象。在该图象上检查有没有孔像素饱和（如果有孔已经饱和，该孔会显示红紫色）。如果发现有孔像素饱和，在“Select Exposure”文件框中减少其曝光长度直到全部96孔全都没有饱和为止。如果没有发现像素饱和，逐渐增加曝光长度直到有孔出现饱和，然后再减少到其没有像素饱和出现的最大曝光长度； 按住键盘上的“Shift”键，点击反应板图象上的A1孔（最左上的那个孔），打开mask文件。您也可以在上方文件框中选择“Show Masks”，然后通过点击窗口上方的方向键选中A1； 点击“Optimize Mask Positions”键，系统会自动调整遮光框到最佳工作位置。无论调整完成或调整失败，系统都会显示相应信息。如果调整失败，重复该步骤一次，如果再次失败，只能使用手动调节（见下文）； 遮光框调整完成后，点击“Save Optimized Masks”键。本次调整结果被保存在mask96.ini 文件中（c:\Program file\Bio-Rad\iCycler\ini）。 External Well Factor Plate 使用后，保留在仪器中，继续下面的PURDY。 注意：如果想调整某个孔的遮光框位置，点击反应板图象上的相应孔，其显示色会由绿变蓝，此时点击图象上方的各方向箭头键即可调整其遮光框位置。图象右上方的“Average inner fluorescence”显示该孔的内方格读数，“Average outer fluorescence”显示该孔外方格读数，“Saturated pixel count”显示该孔的像素饱和度。点击图象内该孔外的任何位置，系统会保存对其的调整，同时该孔显示色由蓝变绿，相应读数和功能键恢复到针对整个反应板的状态。 Mask窗口简介 窗口顶部的箭头键用来手调遮光框的位置；窗口右上部的数据分别代表反应板全部96孔平均遮光框内矩阵（Inner ）、外矩阵（Outer）读数和已经像素饱和的孔数（Satutated）。用户如果点击96孔模拟布局图上的某孔后，该孔在布局图上会变蓝，而上述三个数据也就分别显示该孔的遮光框内方格、外方格的读数和像素饱和度。 窗口右侧可以选择滤光镜选择转轮上的位置（Position Filters）和曝光长度(Select expos