110基础生物化学实验@中科大实验二 正交法研究分析影响酶活力的因素.pptVIP

蔗糖酶的分离提纯及酶促反应动力学实验 ; 内容提示 ; 一、目的要求 ; 二、实验原理;Date;Date;Date;4、Folin-酚法测定蛋白质含量的原理： 1）凡含有两个及两个以上肽键（—CO—NH—）的化合物（如双缩脲：H2N—CO—NH—CO—NH2），在碱性溶液中（如Folin-甲试剂）都能与Cu2+作用，形成紫色的复合物； 2）蛋白质是由多个氨基酸通过肽键连接起来的，故所有的蛋白质均可与Folin-甲试剂反应，形成紫色的铜-蛋白质复合物； 3）铜-蛋白质复合物在pH=10的碱性溶液中可将磷钼酸-磷钨酸（Folin-乙试剂）还原成兰色的钼蓝和钨蓝混合物，其颜色的深浅（在一定范围内）与蛋白质的含量成正比； 在测定液体蛋白质样品含量的常用方法中（双缩脲法、 Folin-酚法和紫外吸收法），Folin-酚法的灵敏度最高（比紫外吸收法高10-20倍，比双缩脲法高100倍），所以我们选用??方法。;1）有开放性的长链结构、较大的表面积，所以对Pr 的吸附容量大； 2）纤维素上离子基团的数量不多且排列疏散，对 Pr的吸附不是太牢固，所以用缓和的洗脱条件即 可达到分离的目的，不致引起Pr的变性； 3）用其装好的层析柱在较广的pH和