LL37的来源、结构、生物活性和应用介绍.ppt

* LL37的结构、作用与研究进展 汇报人：孙梓桉 2013年6月23日 目录 1 2 3 4 LL37的来源 LL37的结构特点 LL37在肺部疾病中的研究进展 LL37的主要生物活性 LL37是Cathelicidin蛋白N端的37个氨基酸，因其开始的氨基酸分别为L-L而得名。它是Cathelicidin家族中唯一存在于人体的抗菌肽。 LL37是中性粒细胞特殊颗粒中的主要蛋白质，广泛存在于骨髓、睾丸、中性粒细胞、单核细胞、舌、食管、子宫颈及阴道鳞状上皮细胞中。 LL37在中性粒细胞中以失活前体蛋白的形式合成与储存，前体蛋白含一个信号肽、cathelin保守区域和37个氨基酸残基的活性肽，分子量为19.3KD。 细胞被激活后通过丝氨酸蛋白酶-3和其他蛋白水解酶的作用剪切信号肽，释放出有活性的LL37，除去信号肽后的表观分子量为18KD，称为hCAP-18。(hCAP-18/LL37) 来源 Cathelicidin家族是哺乳动物防御系统的主要成员，是一类结构多变的抗菌肽，因在表达的信号肽与成熟肽之间含有一高度保守的cathelin肽段而自成一家族。最初从猪白细胞中分离出来，因结构与一种组织蛋白酶L抑制剂相似而命名。在N末端由100个氨基酸残基构成，含有高度保守的cathelin结构域，而C末端含有抗菌活性域。 抗菌肽（antibacterial peptides）是由基因编码、具有抵御外界微生物侵害，清除体内突变细胞的一类小分子多肽，是生物体内天然免疫系统的重要组成部分。 抗菌肽 阴离子抗菌肽 阳离子抗菌肽 具有α螺旋结构，无半胱氨酸 含2个或3个二硫键的β片层 富含特定氨基酸，无半胱氨酸的延伸肽 含有1个二硫键的抗菌肽（位置常在C末端） LL37 结构 LL － 37 LLGDFFRKSKEKIGKEFKRIVQRIKDFLRNLVPRTES Human E，BC 结构 LL-37由 37 个 氨 基 酸 组 成 ， 氨 基 酸 序 列 LLGDFFRKSKEKIGKEFKRlVQRIKDFLRNLVPTES，分子量为 4.5kD N-末端疏水性高，分子的中央部氨基酸残基(13-34)形成一个典型的双亲螺旋结构，此结构与抗菌活性有关 氨基酸 LL-37 5′端上游启动子区域- 28 位点，有一 TAAA 序列，可能有 TATA 盒功能。 启动子区域还含有一个 NF-IL6 结合位点、三个急性期反应因子(APRF) 结合位点,APRF 又称信号传导和转录活化因子( STAT) 3，参与急性期反应炎症和造血。 编码基因 1、抗细菌作用 hCAP-18/LL-37 具有广谱抗菌作用，对 G+菌、G-菌均有杀灭作用，其抗菌活性(最小抑菌浓度MIC)多在微摩尔水平。 已经明确证实LL-37在骨髓以及附睾的头部和尾部为固有表达,而在上皮细胞包括角质细胞,非角质细胞如口腔黏膜、舌、食管、宫颈、阴道、肺腺上皮、肺泡巨噬细胞内诱导表达。 LL-37在人体内广泛存在表明其在抗微生物侵袭中起到重要作用。 LL-37在呼吸道上皮高度表达可保护肺部免受许多病原微生物的侵袭。 LL-37/hCAP-18体外可杀灭金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和肠球菌;其杀菌活性与气道的其它抗微生物蛋白如溶菌酶、乳铁蛋白等有协同作用。 LL－37 可能通过多聚体的 N 端与双亲性磷脂分子相互作用，扰乱膜脂分子排列，影响细胞膜的结构和功能，从而起到杀菌作用，即所谓的“地毯式”模型。 1、抗细菌作用 抗菌谱较广、抗菌活性一般 抗菌作用具有构象依赖性 抗菌作用与肽链中正电荷密切相关 抗菌活性可因血浆蛋白存在而降低 对细胞膜的损害是非特异的 LL37抗菌 作用特点 2、抗内毒素作用 细菌细胞壁的脂多糖(LPS)是内毒素的主要成分,LPS与血中LBP(LPS-binding protein)作用,LBP可介导LPS与CD14的结合形成LPS-CD14复合物,该复合物可通过细胞膜的Toll受体TLRs(Tol-l like receptors)信号系统,激活NF-JB转录因子和胞外信号调节激酶,从而诱导炎症细胞因子的产生,其中TNF是一个主要的分子。 LL-37可以显著抑制LPS和LBP的结合,从而抑制LPS与CD14的结合;此外,LL-37也能结合到CD14分子上而抑制LPS与CD14的结合。 LL-37的α-螺旋构象和碱性氨基酸所带的正电荷与抗LPS作用有关。LL-37的N末端32个氨基酸序列对抗LPS的作用最强,带阳离子的抗生素如多黏菌素B可以中和某些类型的LPS,但由于其毒性大而限制了临床应用。 对内毒素的作用既有直接作用也有间接作用,体外研究表明LL-37可以和内毒素直接结合而中和其毒性。但L