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DNA的体外扩增 引物（primer）：与目的DNA片段末端互补的寡核苷酸片段。 TaqDNA聚合酶：从水生栖热菌（Thermus aquaticus)中分离得 到的耐热的DNA聚合酶。 基本反应： 1）变性 加热，模板DNA经热变性，双链被解开，成为两条 单链 2）退火 温度降低，寡核苷酸引物与模板DNA配对 3）延伸 在适宜条件下，引物3，端向前延伸，合成与模板互补的DNA链 性状稳定的菌种是微生物学工作最重要的基本要求，否则生产或科研都无法正常进行。 影响微生物菌种稳定性的因素： a）变异；b）污染； c）死亡。 第八节 菌种的衰退、复壮与保藏 在掌握微生物遗传学相关知识的基础上，了解微生物菌种保藏的方法和原理。 一、菌种的衰退与复壮 纯菌种 自发突变 不纯菌种 突变个体 传代增殖 原始个体 衰退菌种 衰退：菌种出现或表现出负变性状 1）从衰退的菌种群体中把少数个体再找出来，重新获得具有原有典型性状的菌种。 2）有意识地利用微生物会发生自发突变的特性，在日常的菌种维护工作中不断筛选“正变”个体。 菌种的复壮： 二、防止衰退的措施 1）减少传代次数； 2）创造良好的培养条件； 3）利用孢子或者芽胞传代 4）经常进行纯种分离，并对相应的性状指标进行检查； 5）采用有效的菌种保藏方法 三、菌种保藏 目的：在一定时间内使菌种不死、不变、不乱， 以供研究、生产、交换之用 1）斜面传代保藏：有些菌要定期传代，否则，容易死亡 2）干燥法 A．沙土管法 保鲜细菌芽胞可用此法 B．麸皮管法 保藏霉菌、放线菌孢子可用此方法 C．干燥法 （3）冷冻法 A 冷冻干燥法 适于保鲜多种微生物，特别是细菌适用于此 法保藏 B 液N保鲜法（-196℃） 适于不生孢子的丝状真菌的保藏。 C -70℃低温保藏，需超低温冰箱。 （4）?? 悬液法 将微生物细胞悬浮在水、甘油、蔗糖液、葡萄糖液、盐 水、磷酸缓冲液中，某些细菌、酵母用此法可保藏几年至近十年。 * * * * 第五节 基因突变和诱变育种 基因突变：一个基因内部遗传结构或DNA序列的任何可 遗传的改变。 野生型（原始性状） 基因突变 突变型（新性状） 一、基因突变的定义 自发突变：在自然条件下发生的基因突变。 诱发突变：利用物理化学因子处理微生物使其产生的突变。 回复突变：突变菌株发生突变，回复到出发菌株的状态。 基因突变分为 二、基因突变的类型 同义突变：碱基的变化没有改变产物氨基酸序列的变化。 错义突变：碱基序列的变化引起产物氨基酸的变化。 无义突变：碱基的改变是密码子变为终止密码子。 移码突变：碱基的缺失或插入使翻译的阅读框发生改变， 从而使氨基酸序列完全变化。 不同的碱基变化对遗传信息的改变不同： 常见的微生物突变类型： 1、营养缺陷型（auxotroph） 特点： 在选择培养基（一般为基本培养基）上不生长 负选择标记 （突变株不能通过选择平板直接获得） 缺乏合成其生存所必需的营养物的突变型。 2、抗药性突变型（resistant mutant) 由于基因突变使菌株对某种或某几种药物，特别是抗生素，产生抗性的突变型。 3、条件致死突变型(conditional lethal mutant) 在某一条件下具有致死效应，而在另一条件下没有致死效应的突变型。 4、形态突变型(morphological mutant) 指造成形态改变的突变型。 5、其他突变型 如毒力、糖发酵能力、代谢产物的种类和产量以及对某种药物的依赖性突变型等。 1）自发性 2）不对应性 3）稀有性 4）规律性 三、基因突变的机制 5）独立性 6）可诱变性 7）遗传性 8）可逆性 1、基因突变的特点： 基因突变的自发性和非对应性的证明 一种观点认为，突变的原因和突变的性状间是相对应的，并认为这就是“定向变异”、“驯化”。 另一种观点认为，基因突变是自发的。 如何证明基因突变的非