三疣梭子蟹血蓝蛋.pptx

三疣梭子蟹血蓝蛋白基因的克隆与表达 姓名：董慧 学号：1411075820 主要内容 一、前言 二、实验目的 三、实验材料与思路 四、参考文献 一、前言 三疣梭子蟹概述 基本信息：三疣梭子蟹( Portunus trituberculatus) 隶属甲壳纲 ( Crustacea) , 十足目 ( Decapoda) , 梭子蟹科( Portunidae) , 梭子蟹属( Portunus) , 又称梭子蟹、枪蟹、海螃蟹、海蟹、门蟹等。 是一种重要的海洋经济动物,三疣梭子蟹的体色随周围环境而变异。表面有3个显著的疣状隆起，1个在胃区，2个在心区。其体型似椭圆，两端尖尖如织布梭，故有三疣梭子蟹之名。 分布情况： 广泛分布于中国、日本、朝鲜及马来西亚群岛等海域。梭子蟹一般在3-5米深海底生活及繁殖，冬天移居到10-30米的深海，喜在泥沙底部穴居。 摄食习性：梭子蟹属于杂食性动物喜欢摄食贝肉、鲜杂鱼、小杂虾等，也摄食水藻嫩芽、海生动物尸体以及腐烂的水生植物。 繁殖情况：一般从南到北，3～5月和9～10月为生产旺季，渤海湾辽东半岛4～5月产量较多。 特点：具有肉质好、生长快、产量高等优点, 一直是很受国内外消费者欢迎的水产品。1981 年被列为我国海洋水产养殖对象, 是我国重要的海洋渔业资源。 研究进展：自 1993 年虾类白斑综合征 ( White SpotSyndrome, WSS) 在世界范围内蔓延以来, 对虾养殖产业曾受到很大冲击, 而蟹类的人工养殖却呈快速增长趋势, 其中三疣梭子蟹以其食用营养价值高、生长发育速度快等优点, 逐渐成为水产养殖业主要养殖对象。自 20 世纪 50 年代起, 国内外学者相继对三疣梭子蟹生活习性、生理生化、胚胎发育、高产养殖、群体遗传结构、超微结构观察和核型分析等方面做了深入的研究, 而对三疣梭子蟹分子生物学展开的研究工作尚处于起步阶段, 且主要集中在分子标记研究领域。 一、前言 血蓝蛋白的结构 血蓝蛋白又称血蓝素,是一种多功能蛋白。 典型的甲壳动物血蓝蛋白是由六个高度螺旋的体积为10nm×10nm×10nm、氨基酸数为630～660、分子量为70～80ku的异源亚基构成的六聚体(hexamer)(如图A);六聚体中每个亚基折叠为三个结构域,其中第一、三结构域分别为亚基蛋白的N、C端,第二结构域含血蓝蛋白的活性部位,活性部位结合有两个铜离子CuA和CuB,每个铜离子分别与蛋白质链上三个组氨酸的咪唑氮原子配位,这两个铜离子是血蓝蛋白结合一个O2分子所必需的。每个亚基的三个结构域在六聚体中有序排列,一、三两个结构域包被围绕着活性部位所在的第二结构域(如图B） 一、前言 血蓝蛋白的功能 近年来已有研究表明血蓝蛋白除载氧外,还具有酚氧化物酶活性、抗细菌和抗病毒活性、转运金属离子、储存蛋白质、渗透压调节、作为蜕皮激素的载体、参与表皮的固化等作用,是一种多功能蛋白,而且有可能是表皮的组成成分。 1、血蓝蛋白的载氧特性 血蓝蛋白最基本功能就是运输氧。当氧分压高时,活性部位的两个Cu以Cu2+形式存在, 结合一个O2形成蓝色氧合血蓝蛋白。氧分压低时,Cu以Cu+形式存在,O2从血蓝蛋白 中解离出来,形成无色脱氧血蓝蛋白(hemocyanin)。血蓝蛋白通过这种可逆性与氧结 合的方式,供给动物机体生理代谢对氧的需求。(如图D) 一、前言 血蓝蛋白的功能 2、血蓝蛋白的免疫学特性 许多学者研究认为,血蓝蛋白可能是甲壳动物中一种新的重要免疫分子。 血蓝蛋白的酚氧化酶(phenoloxidase,PO)活性：酚氧化酶原激活系统在甲壳动物的免疫识别和防御中起着关键作用,近年的研究表明甲壳动物血蓝蛋白与酚氧化酶在物理化学性质、蛋白质一级结构和三级结构、基因序列等方面非常相似,并发现血蓝蛋白还具有类似酚氧化酶的活性。 血蓝蛋白的抗菌肽活性：抗菌肽(antibacterial peptides)是动物免疫防御系统产生的一类广谱抗菌性小分子多肽,对于缺乏免疫球蛋白介导的特异性免疫的甲壳动物来说,抗菌肽的作用更是显得至关重要。 血蓝蛋白的凝集活性(agglutinative activity)：甲壳动物凝集素能使细菌、脊椎动物的红细胞等发生凝集,使其失去感染力,并促进血细胞的吞噬和识别,是甲壳动物体内的一种免疫识别因子。近年研究表明,血蓝蛋白也具有一定程度的凝集活性。 一、前言 血蓝蛋白的功能 3、血蓝蛋白的其它功能特性 血蓝蛋白结构复杂,分子中有相当数量的金属结合位点,可作为金属离子的载体。 血蓝蛋白还具有多种游离基团,易与一些特异分子如刀豆球蛋白A、γ-球蛋白和特异分子的配体连接形成复合物,再利用抗原抗体或配体受体反应使该复合物与细胞表面的特异分子起反应。 甲壳动物将体内富余蛋白质以血蓝蛋白形式储存,是储存蛋白能量的有效途径之一;