斑马鱼的性腺发育教程.pptVIP

人工受精 将鱼放入冰水中，直至不太活动为止。 雌鱼：轻压腹部，卵子流出。收集到小培养皿中。 雄鱼：同雌鱼。加1ml D-hanks液稀释。 将稀释精子加入卵子中。 卵细胞的分离及培养 用D-Hank’s溶液洗去卵巢周围附带的脂肪、结缔组织及血块等杂质。 将部分卵巢置于一装有新鲜D一Hank’s溶液的培养皿中，用眼科镊小心撕开卵巢外膜并轻轻抖动，同时用另一眼科镊将卵细胞从结缔组织中剥离。 当卵细胞基本从卵巢中分散出来后，用移液管轻轻吹打卵细胞5一10次至卵细胞单个分离。 用D一Hank’S溶液洗涤分离好的卵细胞2一3次。 卵细胞培养取20一30个卵细胞于直径 35mm无菌培养皿中，加人3ml培养液，封口，于培 养箱内27℃、饱和湿度条件下成熟培养18h。 斑马鱼的性腺发育 精巢的组织学结构和不同发育阶段生殖细胞形态 精巢一对，位于腹腔背部两侧，体积较小，以系膜与体壁相联，左右精巢彼此分开，在尾端合并成一条很短的输精管，和一般鲤科鱼类相同。 生殖上皮随着结缔组织向精巢内部延伸，形成许多隔膜，把精巢分成许多不规则的精小叶，从其横切面上可见许多精小叶紧密排列，但没有一定的规律性，精小叶为精巢的实质部分，因其呈管状又可称为精小管。 在精小叶内由许多精小囊组成，随着精巢的发育，精小叶内各精小囊间生精细胞发育不同步，而在同一精小囊内生精细胞发育是同步的。 精小叶中央为小叶腔，小叶腔在精巢内相互连接成网状，最后通到输精管，精原细胞位于精小叶的边缘处，在分化过程中，当生殖细胞在精小囊内发育成为成熟的精子时，精小囊破裂，成熟的精子释放到小叶腔中，各小叶腔内的精子最后汇集到输精管内并可借助于输精管排出，因此成熟的精子只在小叶腔和输精管内存在。 生殖细胞在发生上由外向里可分为精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞和精子。 繁殖期，V 期精巢 III 期精巢；小叶腔明显，初级精母细胞排列多层，比例尺示 24μm Sg,精原细胞；ScⅠ,初级精母细胞；ScⅡ，次级精母细胞；St,精子细胞；Sz,精子；LL，小叶腔；LC，间质细胞；SC,支持细胞；ST,精小囊 VI 期晚期精巢, 示精小囊内发育同步的各期生殖细胞，比例尺示 24μm Sg,精原细胞；ScⅠ,初级精母细胞；ScⅡ，次级精母细胞；St,精子细胞；Sz,精子；LL，小叶腔；LC，间质细胞；SC,支持细胞；ST,精小囊 V 期早期精巢，示精原细胞，精母细胞，精子细胞和精子，比例尺示 24μm Sg,精原细胞；ScⅠ,初级精母细胞；ScⅡ，次级精母细胞；St,精子细胞；Sz,精子；LL，小叶腔；LC，间质细胞；SC,支持细胞；ST,精小囊 V 期中期精巢，示成熟的精子充满整个精小叶，比例尺示 24μm； Sg,精原细胞；ScⅠ,初级精母细胞；ScⅡ，次级精母细胞；St,精子细胞；Sz,精子；LL，小叶腔；LC，间质细胞；SC,支持细胞；ST,精小囊 Ⅵ期精巢，示精子排出后留下的空腔，腔内有少量残存的精子和第二次发育由精原细胞有丝分裂产生的初级精母细胞. Sg,精原细胞；ScⅠ,初级精母细胞；ScⅡ，次级精母细胞；St,精子细胞；Sz,精子；LL，小叶腔；LC，间质细胞；SC,支持细胞；ST,精小囊 卵巢的组织学结构和不同发育阶段生殖细胞形态 斑马鱼卵巢一对，左右两叶，大部分对称；成熟卵巢呈囊状，位于体腔内，外被由平滑肌和结缔组织形成的卵巢膜，卵巢膜不发达。 卵巢位于腹中线两侧 ,在鱼体后端汇合成一短的输卵管 ,进入泄殖腔,由泄殖腔开口于体外。 卵母细胞直径、核径和核质比在不同时相中的变化:　 卵母细胞在Ⅱ时相增长不明显，在Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ时相期增长迅速 胞核的直径在Ⅱ时相增长迅速，在Ⅲ时相中期、Ⅳ时相增长缓慢，几乎没有变化 核质比在第Ⅱ时相最大，随着卵母细胞的发育，核质比越来越小 卵巢壁: 由两层被膜构成 ,外层为腹膜 ,内层为白膜。白膜由外到内依次为扁平上皮细胞、 疏松结缔组织、 间质组织和生殖上皮。 产卵板: 白膜中的结缔组织向卵巢内部伸展与卵巢生殖上皮共同构成板层状结构 ,称产卵板 ,是卵子产生的地方。 卵巢腔: 存在于卵巢内部的空腔 ,与输卵管相通。 S B 产卵板 不同龄雌鱼卵巢发育 0～16日龄: 没有观察到性腺发育情况。 17～22日龄: 原始生殖细胞没有两性分化 ,数 量开始增多 ,并逐渐聚集成团 ,细胞质嗜酸性 ,核较大 ,嗜碱性 ,有一明显核仁。 27日龄: 原始生殖细胞分化为卵原细胞 ,体积变大 ,数量增多 ,成排排列 ,在腹腔后背部分布 ,与肝胰脏相连。 32～57日龄: 卵巢体积较小 ,位于腹腔后背部 ,靠近肝胰脏。卵巢内主要为第 Ⅰ时相卵母细胞 ,细 胞体积小 ,圆形 ,细胞质少 ,有一明显细胞核。核中部有 1～2个核仁 ,核内染色质细丝状 。 62日龄