革兰氏染色的过程.PPT

细菌的革兰氏染色 主要操作步骤 制片 初染 媒染 脱色 复染 镜检 染色示范 * * 目 的 要 求 学习并掌握革兰氏染色法。 了解革兰氏染色原理。 巩固显微镜的使用方法及无菌操作技术。 实 验 材 料 菌种 参考菌：金黄色葡萄球菌(G+), 大肠杆菌 (G-) 仪器 显微镜 材料 载玻片、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、染色缸等 染料 草酸铵结晶紫染色液、卢戈氏碘液、95%乙醇、0.5%番红染色液 A. 加小滴水? B. 涂成薄层 C. 固定菌体 涂片制备过程 革兰氏染色的过程——制片 细水冲洗 结晶紫初染1-2min 碘液媒染1min 95%酒精脱色 20s-30s 蕃红复染 2-3min 细水冲洗 细水冲洗 革兰氏染色的基本原理 根据细菌细胞壁的组分和结构不同，通过革兰氏染色法可将所有的细菌区分为两大类G+和G- 革兰氏染色是丹麦医生 C.Gram（革兰）于1884年发明的一种鉴别不同类型细菌的染色方法 细胞壁 革兰氏阳性菌 (G+) 革兰氏阴性菌 (G-) 厚度与强度 厚、致密、坚韧 薄、疏松 肽聚糖数量、含量 多层、含量高、占细胞干重40—90% 单层、含量低、占细胞干重5—10% 脂类含量 少、占细胞干重1-4% 多、占细胞干重11-22% 磷壁酸（垣酸） + - 脂多糖、磷脂、脂蛋白 - + 肽聚糖 脂蛋白 磷壁酸 外膜 革兰氏染色原理.mp4 革兰氏染色成败关键： 酒精脱色，脱色不够将G-转变为G+，脱色过度将G+变成G-； 涂片要均匀、薄； 菌龄影响染色，菌龄老、陈旧的细菌培养物，往往G+转变成G-，一般做革兰氏染色用18小时左右的细菌培养物，不要超过24小时，以免影响染色性。 革兰氏染色.mp4 革兰氏染色注意载玻片要洁净，滴无菌水和取菌不宜过多，涂片要均匀，不宜过厚；热固定温度不宜过高，否则会改变甚至破坏细胞形态；水洗时不要直接冲洗涂面，而应使水从载玻片的一端流下，水流不宜过急，过大，以免涂片薄层脱落。 革兰氏染色结果是否正确，乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节，脱色不足，阴性菌被误染成阳性菌，脱色过度，阳性菌被误染为阴性菌。 注意事项 实验报告 1．绘图说明染色结果。