基因工程制药讲义.pptVIP

第二章 基因工程制药;第一节 概述 第二节 基因药物生产的基本过程 第三节 目的基因的获得 第四节 基因表达 第五节 基因工程菌的稳定性 第六节 基因工程菌生长代谢的特点 第七节 基因工程菌发酵 第八节 基因工程药物的分离纯化 第九节 基因工程药物的质量控制 第十节 基因工程药物制造实例;一、基因的概念: DNA分子中含有特定遗传信息的一段核苷酸序列，是遗传物质的最小功能单位。 ;①基因可自我复制 ②基因决定蛋白质结构 ③基因可突变 基因按功能分为 ①结构基因；②调控基因;1-DNA的结构 四种核苷酸（A T C G）连接。DNA二级结构为双螺旋结构。 2-DNA的性质与功能 ①吸收光谱260 ②电场中泳动 ③变性 复性 杂交;（一）DNA的复制 　　半保留复制; （二）基因表达;2、翻译：以mRNA为模板，tRNA作为运载工具,将活化的氨基酸在核糖体上合成蛋白质的过程。 （1）分为三个阶段： ①起始 ②延长 ③终止 ;● 基因工程: 通过对Nucleic acid 分子的Insert，Assemble and Recombinant而实现遗传物质的重新组合，再借助Virus ，Bacterium ，Plasmid or other Vectors，将Target gene转移到新的 Host Cell System，并使Target Gene在新的Host cell system 进行Replication and Expression的技术。 ● 基因工程主要研究任务: Gene isolation ，synthesis ， Incision(切割)，recombinant ，transformation and expression. Gene Manipulation/Gene cloning/DNA recombination. ● 基因工程技术最成功的成就: 用于新型生物技术药物的研制;基因工程基本过程;● 传统制药存在的问题： A、材料来源困难或制造技术问题而无法付诸应用； B、从动物脏器中提取出来，也因造价太高，或因来源困难而供不应求； C、由于免疫原性等缘故，使它们在使用上受到限制。 ● 基因工程技术的特点： 能够十分方便有效地生产许多以往难以大量获取的生物活性物质，甚至可以创造出自然界中不存在的全新物质。 ;●基因工程技术的应用特点： A、为癌种、病毒性疾病、心血管疾病和内分泌疾病的预防、治疗和诊断提供新型疫苗、新型药物和新型诊断试剂。 B、基因工程技术的最大好处在于它能从极端复杂的机体细胞内取出所需要的基因???将其在体外进行剪切拼接、重新组合，然后转入适当的细胞进行表达，从而生产出比原来多数百、数千倍的相应的蛋白质。;●利用基因工程技术生产药品的优点：;（4）内源性生理活性物质在作为药物使用时存在的不足之处，可通过基因工程和蛋白质工程进行改造和去除。如白细胞介素-2的第125位半胱氨酸是游离的，有可能引起-S-S-键的错配而导致活性下降，如将此半胱氨酸改为丝氨酸或丙氨酸，白细胞介素-2的活性以及热稳定性均有提高； （5）利用基因工程技术可获得新型化合物，扩大药物筛选来源。;“863”高技术计划在生物技术领域研究的三个主题之一是： 新型药物、疫苗和基因治疗，重点是利用现代生物技术手段，开发化学合成法难以生产的药品。;第二节 基因工程药物生产的基本过程;目的基因的克隆 构建DNA重组体 将DNA重组体转入宿主菌构建工程菌 工程菌的发酵 外源基因表达产物的分离纯化 产品检验等。;获得目的基因;上游阶段： 主要是分离目的基因、构建工程菌(细胞)。 目的基因获得后，最主要的就是目的基因的表达。 选择基因表达系统主要考虑的是保证表达的蛋白质的功能，其次是表达的量和分离纯化的难易。 此阶段的工作主要在实验室内完成。;下游阶段： 从工程菌的大量培养一直到产品的分离纯化和质量控制。 此阶段是将实验室的成果产业化、商品化，主要包括工程菌大规模发酵最佳参数的确立，新型生物反应器的研制，高效分离介质及装置的开发，分离纯化的优化控制，高纯度产品的制备技术，生物传感器等一系列仪器仪表的设计和制造，电子计算机的优化控制等。;第三节 目的基因的获得;为了克隆编码某种特异蛋白质多肽的DNA序列，可从产生该蛋白质的真核细胞中提取mRNA，以其为模板，在逆转录酶的作用下，反转录合成该蛋白质mRNA的互补DNA（cDNA第一链），再以cDNA第一链为模板，在逆转录酶或DNA聚合酶I（或者Klenow大片段）作用下，最终合成编码该多肽的双链DNA序列。 cDNA与模板mRNA序列严格互补，而不含内含子。;1、mRNA的纯