维生素类药物的分析精品.ppt

(五) 高效液相色谱法 例如：甲硫氨酸维B1 注射液中甲硫氨酸和维B1的含量测定 方法：色谱柱：C18 流动相：( A )0. 005 mol·L 庚烷磺酸钠溶液(磷酸调pH 至3. 0)与(B)乙腈为流动相，梯度洗脱 检测波长为210 nm; 甲硫氨酸 VB1 (六)流动注射化学发光法 维生素 B1在碱性介质中被铁氰化钾氧化，产生微弱化学发光, 罗丹明B 可快速吸收反应释放的能量而跃迁至激发态，以光辐射的形式返回基态，十六烷基三甲基溴化铵(CTMAB) 可敏化其发光强度，使光强度大大增强。 A 样品+ CTMAB B 罗丹明B C 铁氰化钾+ NaOH P 蠕动泵 F 流通池 1、罗丹明B-CTMAB化学发光法 可用于测定维生素B1 片和注射液 V 进样阀 PMT 光电倍增管 VB1 和KIO4 在酸性介质中的反应为常规的氧化-还原反应,不产生化学发光。反应剩余的KIO4 注入到Luminol流路中,KIO4 与Luminol 在混合管中发生化学发光反应,但因反应灵敏,在未到达检测器之前反应已经完成,故此发光强度未被检测,然后剩余的Luminol 继续与Na2 SO3发生化学发光反应而在发光流通池中被检测, 其发光强度与维生素B1 的浓度在一定的范围内呈良好的线性关系。 2、FI-化学发光法间接测定 （七）分光光度法 维生素B1 在pH 2的盐酸溶液中以分子状态存在,稳定性良好,但pH大于5时,将会分解。在pH 7 时维生素B1 完全分解。利用光谱差异测定。测定波长：249nm 1、差示分光光度法 2、动力学光度法 在氢氧化钠介质中,维生素B1能灵敏催化高碘酸钾氧化苯并红紫4B 使之褪色,在一定范围内,苯并红紫4B 褪色程度与维生素B1浓度成正比 3、酸性染料比色法 利用维生素B1 与酸性染料溴麝香草酚蓝成盐,在420 nm波长处测定吸收度 (八) Fe ( Ⅱ)- 2 ,2’ 联吡啶分光光度法 (九) 电位滴定法 用银电极为指示电极,甘汞电极为参比电极,AgNO3 标准溶液为滴定剂 第五节 维生素C的分析 L－抗坏血酸 一、结构与性质 * * 1、多羟基化合物：具糖的性质 性质: 2、2，3-烯二醇结构：强还原性——氧化还原滴定法 3 、C3-OH : 酸性,一元酸，可与Na2CO3成盐 (O) 5、水解反应 ：与碱反应 6、UV特征 4、手性C原子（C4、C5）：具旋光性，L(+)－抗坏血酸活性最强 λmax = 243nm （一）与氧化剂的反应 二、鉴别试验 Cu2O↓ （红色） VitC AgNO3 Ag↓ （黑色） 2，6-二氯靛酚钠 兰色消失 KMnO4 紫红色褪去 Felling试剂 （三） UV BP 0.01mol/L HCl （二）糖类的反应 USP VitC 三氯醋酸 或盐酸 戊糖 脱水 糠醛 吡咯 50℃ λmax = 243 nm = 545-585 蓝色 指示剂 淀粉指示液 原理 1、 三、含量测定 H+ （一）碘量法 ChP （1）溶解：加新沸的冷H2O，减少水中溶解氧对测定的影响 （2）酸性环境：HAC，减慢VitC被O2氧化速度 （3）立即滴定：减少O2的干扰 （4）附加剂干扰的排除 片剂 —— 滑石粉 —— 过滤 注射剂 —— 抗氧剂 —— 丙酮 甲醛 Na2SO3 ,NaHSO3，Na2S2O3 ,Na2S2O5 2、讨论 （二）2，6-二氯靛酚钠滴定法 USP 、JP 原理 1、 VitC + 去氢VitC + （玫瑰色） （无色） 自身指示终点法 以出现玫瑰色为终点 缺点： 滴定液不稳定，需经常标定 干扰多 氧化力较强 （三） HPLC法 HPLC法测定制剂、生物样品、果汁中维生素C 方法 离子交换色谱法 离子对色谱法 分配色谱法（正、反相） 血、尿、组织、细胞等 检测器：紫外、安培检测器 例如：RP-HPLC测定多维软咀嚼片中维生素C 含量 色谱柱:Hypersil C18柱; 流动相:0. 005mol·L - 1磷酸二氢钾溶液(用磷酸调pH 至3. 6) ; 检测波长:246nm。 1、2 ,4-二硝基苯肼比色法 （四）分光光度法 例如：不同产地枸杞子中维生素C 含量测定 2、胶束增溶分光光度法 维生素C 还原氯化硝基四氮唑蓝(NBT)为蓝色化合物,蓝色化合物被溴代十六烷基吡啶(CPB)在水溶液中形成的胶束增溶,使显色反应灵敏度显著提高。 3、紫外分光光度法 4、邻二氮菲分光光度法