脂肪包被蛋白perilipin的相关研究进展.ppt

脂肪包被蛋白perilipin的研究进展;一 概述; 脂滴相关蛋白中perilipin、ADRP、TIP47是脂滴表面主要的结构蛋白，且三者氨基末端大约100个氨基酸区域高度保守，所以取每个首字母命名为PAT蛋白家族。其中perilipin研究得较为深入，与甘油三酯水解的关系最密切。; Perilipin由PLIN基因编码，人的PLIN基因定位于15q26，含有9个外显子，由于mRNA剪切方式不同，形成A、B、C、D四种同源蛋白体，它们具有相同的氨基末端，不同的羧基末端，其中A含量最多，在脂肪细胞和类固醇生成细胞中表达，B在此两种细胞中有少量表达，而C和D仅表达于类固醇生成细胞。; 以往的研究一致认为perilipin及PAT家族蛋白仅表达于脂质滴表面，而在其他任何亚细胞组分中不存在。但Horst Robenk等人最近的研究显示1)PAT家族蛋白遍布于脂质滴而不只是被限制在脂质滴表面2)PAT家族蛋白显著存在于细胞膜上，PAT家族蛋白在胞质的游离核糖体合成后首先插入细胞质小叶的细胞膜上。; 在3T3-L1脂肪细胞分化的早脂滴表面包被脂肪细胞分化相关蛋白（ADRP)随着细胞分化perilipin开始表达后，虽有高水平ADRP mRNA存在，但ADRP蛋白水平逐渐下降，成熟的3T3-L1脂肪细胞表面仅表达perilipin。;二、Perilipin蛋白的氨基酸序列及序列区域的作用;;;; PKA激发的HSL(激素敏感的脂肪酶）介导的脂解要求1-300氨基酸区域一个或多个PKA磷酸化位点磷酸化，PKA激发的非HSL介导的脂解作用要求301-517氨基酸区域PKA磷酸化位点磷酸化。PKA介导的periA492位丝氨酸磷酸化可促进脂滴的裂解和分散。; periA、B的第17-121位氨基酸序列与ADRP 9-113位氨基酸约40﹪一致，65﹪相似，与TIP-47氨基端有60﹪同源性称PAT-1区，其远端150个氨基酸为同源性有限的PAT-2区，111-182位氨基酸构成5个两性的贝他片层区，其后是疏水序列区，每个疏水序列含16-23个氨基酸。;; 疏水序列分为：位于242-260位的H1，320-342位的H2，349-364位的H3和一个291-318位的酸性区域，疏水序列包含了periA锚定于新生脂滴的所有必需的信息，H1和H2是锚定必需的，H3是一个弱的锚定信号。;; periA氨基酸1-300区域抑制基础脂解作用，促进PKA激发的HSL介导的脂解作用。periA氨基酸301-517区域抑制非HSL介导的基础脂解??促进PKA激发HSL介导和非HSL介导的脂解作用。; periA羧基末端112个氨基酸对甘油三酯的积累至关重要，去除羧基末端后蛋白丧失增加细胞内甘油三酯的能力，这一序列是periA所特有的。;;;三、perilipin的表达调控及降解调控; Peri启动子上包含一个进化上高度保守的PPARr反应元件PPRE、PPRE位于peri基因上游1.9kb处，鼠peri基没有规范的TATA、CAAT和GC修饰，PPRE是脂肪细胞形成时Peri基因转录活化的关键元素。PPAR-r对peri的调节是通过RXR/PPAR-r (维甲酸X受体/过氧化物酶增殖体受体r)与peri启动子上游的PPRE相作用实现的。 ; 在脂肪细胞分化时peri mRNA的升高与PPARr诱导的时间相匹配，PPAR显效剂、噻唑烷二酮类物质如曲格列酮能升高peri基因在完全分化的脂肪细胞中的表达。; peri的降解是通过泛素-蛋白酶体途径实现的。在转染的中国仓鼠卵巢细胞培养基中增加脂肪酸可阻止peri降解，特异的蛋白酶体抑制剂MG132、乳胞素和ALLN可阻止peri降解，然而其他蛋白酶体抑制剂无效。Peri和泛素的共免疫沉淀证明peri与多聚泛素是共轭结合的，且定向于蛋白酶体的降解作用。;四、perilipin对脂解的双重调控; Peri基因敲除小鼠与野生型小鼠喂养同样的食物，peri-/-小鼠脂肪组织减少到野生鼠的约30﹪。分离基因敲除鼠脂肪细胞显示由于缺乏peri的保护功能而出现升高的基础脂解，并显示在激发态下脂解活性明显降低。; 在稳定表达HSL绿色荧光蛋白的中国仓鼠卵巢细胞中也证实，在基础状态下peri磷酸化水平很低，包在油滴表面，形成屏障，保护脂滴内甘油三酯不被脂肪酶水解，而在脂解刺激和CAMP升高情况下，periA磷酸化，使HSL聚集于脂滴表面或通过修饰作用间接地使HSL更易接触脂滴内的甘油三酯而产生脂解。;五、PLIN基因多态性与肥胖危