大肠杆菌YacG锌指结构的金属结合及功能特性-中国生物化学与分子.PDF

ＩＳＳＮ　 １００７⁃７６２６ 中国生物化学与分子生物学报　 ｈｔｔｐ：／ ／ ｃｊｂｍｂ．ｂｊｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ ２０１６年９月 ＣＮ　 １１⁃３８７０／ Ｑ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ３２（９）：１００４ ～１０１１ ＤＯＩ：１０１３８６５／ ｊ．ｃｎｋｉ．ｃｊｂｍｂ 大肠杆菌ＹａｃＧ锌指结构的金属结合及功能特性 １） ２） １） １） １） １） １） ∗ 杨娟娟 ，　 章丽和 ，　 苏晓璐 ，　 卢彬彬 ，　 纪松军 ，　 黄招竹 ，　 王　 伍 １） （ 温州医科大学检验医学院生命科学学院，检验医学教育部重点实验室，浙江 温州　 ３２５０３５； ２）温州市中心医院风湿免疫科，浙江 温州　 ３２５０００） 摘要　 ＹａｃＧ蛋白是一种能够抑制大肠杆菌促旋酶（Ｅ．ｃｏｌｉ ｇｙｒａｓｅ）活性的内源性小分子蛋白质，仅 由６５ 个氨基酸残基组成。 核磁共振（ＮＭＲ）研究发现，ＹａｃＧ结构中含有１个Ｃｙｓ⁃Ｘ２⁃Ｃｙｓ⁃Ｘ１５⁃Ｃｙｓ⁃ Ｘ３⁃Ｃｙｓ序列的锌指结构域，然而其作用并不清楚。 本研究发现，在添加外源锌或者铁的Ｍ９基础培 养基中，表达并纯化得到分别含有锌和铁的ＹａｃＧ蛋白，而在同时添加铁和Ｌ⁃半胱氨酸的Ｍ９ 基础 培养基中可以纯化得到含有铁硫簇的蛋白质。 这表明，ＹａｃＧ 不仅是一个锌指蛋白，也是铁结合或 铁硫簇结合蛋白。 定点突变实验发现，ＹａｃＧ锌指结构中的４ 个半胱氨酸残基突变后，其结合的锌、 铁、铁硫簇的含量都显著下降。 这提示，锌结合、铁结合以及铁硫簇结合的位点均位于锌指结构域 中的４ 个半胱氨酸残基。 体内ＹａｃＧ过表达实验显示，用ＩＰＴＧ在大肠杆菌体内诱导表达野生型 ＹａｃＧ蛋白会导致其生长明显受到抑制，而过表达突变体蛋白（ＹａｃＧ⁃Ｃ１２／ ２８Ｓ）对其生长的抑制作 用将会减弱。 体外实验进一步发现，锌结合、铁结合以及铁硫簇结合形式的ＹａｃＧ蛋白对Ｅ．ｃｏｌｉ ｇｙｒａｓｅ促ＤＮＡ螺旋活性的抑制作用没有明显差别，但是锌指结构突变体蛋白（ＹａｃＧ⁃Ｃ１２／ ２８Ｓ）对 ｇｙｒａｓｅ活性的抑制作用显著减弱。 这说明，完整的锌指结构对ＹａｃＧ抑制ｇｙｒａｓｅ活性的功能具有重 要作用。 此研究有可能为ｇｙｒａｓｅ抑制剂类抗生素药物的研发提供有用的线索。 关键词　 大肠杆菌ＹａｃＧ；锌指结构；铁／ 铁硫簇结合；大肠杆菌ｇｙｒａｓｅ；抑制作用 中图分类号　 Ｑ５１；Ｑ５ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｅｔａｌ Ｂｉｎｄｉｎｇ ａｎｄ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｚｉｎｃ⁃ｆｉｎｇｅｒ Ｍｏｔｉｆ ｉｎＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＹａｃＧ １） ２） １） １） ＹＡＮＧＪｕａｎ⁃Ｊｕａｎ ，ＺＨＡＮＧ Ｌｉ⁃Ｈｅ ，ＳＵ Ｘｉａｏ⁃Ｌｕ ，ＬＵ Ｂｉｎ⁃Ｂｉｎ ， １） １） １） ∗ ＪＩ Ｓｏｎｇ⁃Ｊｕｎ ，ＨＵＡＮＧＺｈａｏ⁃Ｚｈｕ ，ＷＡＮＧ Ｗｕ １） （ Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｌｉｆｅ