融合蛋白EGFP2PPA原核表达及标记肿瘤细胞研究.PDFVIP

浙江理工大学学报 ,第 27 卷 ,第 4 期 ,20 10 年 7 月 J our nal of Zhej iang SciTech U niver sit y Vol . 27 , No . 4 , J ul . 20 10 文章编号 : (20 10) 0406 1505 融合蛋白EGFPP PA 原核表达及标记肿瘤细胞研究 李 　新 , 牛 　娜 , 李 　娜 , 陈　磊 , 路巧然 , 席 　璐 , 李恭楚 (浙江理工大学生命科学学院 , 杭州 3 100 18) 　　摘 　要 : 肿瘤细胞糖基化改变是非常普遍的现象 ,与恶性肿瘤的发生发展有着密切的关系 。掌叶半夏凝集素 ( ) ( P i nel l i a p e d atisect a agglutinin ,PPA 是一种甘露糖特异性结合凝集素 ,与增强型绿色荧光蛋 白 enhanced green fluorescent p rot ein E GFP) ,通过基因工程技术形成融合基因 ,并在大肠杆菌中表达纯化了 E GFPP PA 融合蛋白。实 验结果表明 ,此融合蛋白可以识别实体肿瘤细胞表面的一部分标志 ,如 Hep 3B 、Hu7 、PL C 、B EL7404 以及 A549 ,而 不能识别肝正常细胞 L 02 ,提示实体瘤细胞表面显露的甘露糖残基被此融合蛋白所识别 ,说明 PPA 识别具有甘露糖 表型的实体瘤细胞表面的一部分 ,这些实验结果为进一步阐明甘露糖显露细胞在肿瘤发生发展中的作用提供了新 的研究手段 。 关键词 : 糖基化 ; 掌叶半夏凝集素 ; 融合蛋白; 甘露糖 ; 肿瘤 中图分类号 : Q279 　　　文献标识码 : A 0 　引　言 肿瘤细胞侵袭和转移是肿瘤重要特征之一 ,与肿瘤的恶性程度和肿瘤病人的预后有直接关系[ 12 ] 。越来 越多的证据表明 ,肿瘤细胞表面糖基异常化与肿瘤细胞的侵袭和转移有密切关系 ,这些变化包括糖链在合成 水平上的差异和特殊糖基结构的出现[34 ] 。因此 ,研究细胞膜表面糖蛋白及糖链结构变化对于解释肿瘤细胞 的形成 、发展与转移非常重要 。植物凝集素是一类存在于大多数植物中的蛋白质或糖蛋白。它的最大的特 点在于它们能识别糖蛋 白和糖脂 , 特别是细胞膜 中复杂结构的糖链 , 即细胞膜表面决定簇 。掌叶半夏 ( P i nel l i a Pe d at isect a) 为天南星科半夏属植物 ,其块茎是中国的传统中药材 ,在我国已经有 2000 多年的药 用历史 ,其主要活性成分除活性多糖 、生物碱 、甾醇外 ,还有蛋白质 ,有燥湿化痰 、降逆止呕、消痞散结等功 效[ 5 ] 。掌叶半夏凝集素是半夏总蛋白的重要组分之一 ,能专一结合甘露糖而不结合葡萄糖 ,属于单子叶植物 甘露糖凝集素家族[ 6 ] 。 本研究构建了 E GF PP PA 原核表达载体 ,并表达纯化了该融合蛋白,研究掌叶半夏凝集素对肿瘤细胞 的识别作用 。结果发现 , E GF PP PA 可以特异地结合肿瘤细胞 ,而不结合肝正常细胞 ,表明 P PA 可以特异 地识别肿瘤细胞表面的甘露糖残基 ,从而为进一步研究肿瘤的发生发展以及浸润侵袭提供了新的手段 。 1 　材料与方法 1. 1 　材料与试剂 ( ) ( ) 表达载体 p E T28a + , E. col i BL 2 1 D E3 由本实验室保存 , p E T28aP PA 为本课题组构建 。人肝癌 收稿日期 : 2009 - 06 - 15 ( ) ( ) 基金项 目: 国家自然科学基金 ;浙江省“生物医学工程”重中之重学科开放基金 SW YX0804