催化甾体羟基化的P450氧化酶BM3的蛋白质工程的研究进展.PDFVIP

540 中国医药生物技术 2015 年12 月第10 卷第6 期 Chin Med Biotechnol, December 2015, Vol. 10, No. 6 DOI: 10.3969/j.issn.1673-713X.2015.06.014 ·综述·  催化甾体羟基化的P450 氧化酶BM3 的 蛋白质工程的研究进展 刘星，孔建强 甾体关键位点的羟基化在药用甾体的合成中发挥重要 到的细胞色素 P450 BM3 及其突变体已经被报道能在不同 作用。为探究细胞色素 P450 （CYP450 ）氧化酶 BM3 在甾 的位置羟基化甾体。 体羟基化合成中的潜在应用，基于细胞色素 P450 BM3 的 1.1 CYP450 蛋白质工程逐渐发展起来。在取得的若干 P450 BM3 突变 CYP450 是一类含亚铁血红素的单加氧酶，广泛存在于 酶的基础上，通过新一代测序技术和生物信息学分析等方 各类生物体内，参与多种外源物质的代谢和内源物质的转 法，筛选出催化甾体羟基化的相关 CYP450 。根据易错 PCR 化，如甾类激素、胆汁酸、胆固醇等的代谢。而在人类药物 等定向进化技术获得了突变位点信息，进一步采用（饱和） 代谢中起决定作用的主要是 CYP1 、CYP2 以及 CYP3 酶 定点突变等进化技术对活性氨基酸位点进行分析，再经过筛 亚家族[8] 。尽管 CYP450 氨基酸序列的不一致性高达 90% ， 选获得既高于亲本酶也高于易错 PCR 技术得到的突变酶 但是其序列拥有共同的折叠方式[9] 。CYP450 酶能够催化的 活力的新突变酶，并对突变体进行功能验证，进一步阐明甾 反应主要有烃类化合物的羟基化或环氧化，杂环化合物的 体羟基化的可行性和重要性。此外，P450 BM3 催化底物和 氨、氧、硫部位上的脱烷基化等。在真核生物中，这些酶对 生成产物的选择性可以通过迭代的组合活性位点突变而改 类固醇的合成和生物转化起着重要作用。而哺乳动物肝脏的 变。本文旨在探究近年来科研人员在 P450 氧化酶 BM3 CYP450 对许多药物发挥重要的解毒作用[10] 。虽然这些酶在 蛋白质工程催化甾体羟基化的改良领域中所做的尝试、获得 自然进化中还没有具备现代化学工业所需的催化特性，许多 的成果以及存在的问题，为 P450 BM3 羟基化疏水性甾体 CYP450 显示出宽松的底物特异性，表现为对非天然底物具 [11] 的深入研究提供理论依据。 有一定程度的活性，如应用于一些药物的开发 。 多数 P450 单加氧酶以膜结合形式存在，其发挥活性需 1 概述 要依赖复杂的电子转移系统和昂贵的辅因子，如 NADPH ， 甾体药物在医药领域中占有重要地位，是仅次于抗生素 往往活性较低，且稳定性也较差。而 CYP102 家族的细菌 的第二大类药物[1] ，具有很强的抗过敏、抗感染、抗病毒等 性 P450 单加氧酶