2 FCM样品制备推荐.ppt

脱落细胞单细胞样品的制备 Categorization: 1宫颈脱落细胞悬液的制备 2食管脱落细胞悬液的制备 3胸腹水脱落细胞的制备 4内镜刷检样品单细胞悬液制备 5 冲洗液样品单细胞悬液制备 * 脱落细胞单细胞样品的制备 食管脱落细胞悬液的制备 Protocol: 将食管拉网器上的细胞洗脱到 10ml NS 中,以1500rpm离心沉淀,再用NS洗涤2次,离心500-800rpm，1-2min,弃上清 * 脱落细胞单细胞样品的制备 食管脱落细胞悬液的制备 Protocol: 调整细胞数在2X106/ml,可进行标记染色上机,如不马上检测可用70% 的冰乙醇固定保存 3 在标记染色前如发现细胞有团块聚集，可用0.5%胃蛋白酶(PH1.5-2.0)在37℃水浴箱中消化5-10min，振荡分散为单细胞悬液 * 脱落细胞单细胞样品的制备 Categorization: 1宫颈脱落细胞悬液的制备 2食管脱落细胞悬液的制备 3胸腹水脱落细胞的制备 4内镜刷检样品单细胞悬液制备 5 冲洗液样品单细胞悬液制备 * 脱落细胞单细胞样品的制备 胸腹水脱落细胞悬液的制备 Protocol: 1 抽取胸腹水200-300ml，加入抗凝 剂(肝素或拘橡酸钠)5ml，放入容 器中置0-4℃冰箱静置6-12h，弃 上清 2 留取沉淀液10-20ml，吸入试管 内，以NS洗三次，以1500rpm离 心沉淀5min * 脱落细胞单细胞样品的制备 胸腹水脱落细胞悬液的制备 Protocol: 3 离心沉淀后加入冷拘橡酸缓冲液 5ml，在室温下放置20min 4 用300目筛网过滤后，以PBS洗去 枸橡酸缓冲液，离心沉淀去上清， 加入70%乙醇固定备检 * 脱落细胞单细胞样品的制备 Categorization: 1宫颈脱落细胞悬液的制备 2食管脱落细胞悬液的制备 3胸腹水脱落细胞的制备 4内镜刷检样品单细胞悬液制备 5 冲洗液样品单细胞悬液制备 * 脱落细胞单细胞样品的制备 内镜刷检样品单细胞悬液的制备 Protocol: 1 将刷检的毛刷放入10ml NS 中洗 脱，收集悬液进入试管,以 1500rpm离心沉淀，再以NS漂洗 2-3次，每次500-800rpm离心沉 淀2min，弃上清 * 脱落细胞单细胞样品的制备 内镜刷检样品单细胞悬液的制备 Protocol: 2 以300目筛网过滤，去除细胞 碎片 3 70%冷乙醇固定，置于冰箱 备检 * 脱落细胞单细胞样品的制备 Categorization: 1宫颈脱落细胞悬液的制备 2食管脱落细胞悬液的制备 3胸腹水脱落细胞的制备 4内镜刷检样品单细胞悬液制备 5 冲洗液样品单细胞悬液制备 * 脱落细胞单细胞样品的制备 冲洗液样品单细胞悬液的制备 Protocol: 1 用300-500ml NS 冲洗胃或膀胀，冲洗一定时间后，吸出冲洗液放入容器中于冰箱内置 6-12h 2 取沉淀20-40ml，离心沉淀，并以NS洗两次，弃上清液 3 过滤后加入70%乙醇固定备检 * 脱落细胞单细胞样品的制备 * 脱落细胞单细胞样品的制备 * 脱落细胞单细胞样品的制备 * Source: 1 实体组织 2 血液 3 脱落细胞 4 单层培养细胞 Introduction * 单层培养细胞样品的制备 Protocol: 1 首先用PBS冲洗细胞2遍 以0.25%胰酶消化细胞2min左右，以吸管吹打细胞至其悬浮 3 收集细胞至离心管，1000rpm, 5min离心，弃上清 4 加入70%乙醇固定备检 * 单层培养细胞样品的制备 * 单层培养细胞样品的制备 * 血液单细胞样品的制备 淋巴细胞的制备 protocol: 上层为血浆层，中层为分离液层 (淋巴细胞所处的位置在血浆层 与分离液层中间)，底层为红细