分子生物学实验-肉制品鉴定.pptVIP

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  • 2018-04-26 发布于福建
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肉制品基因鉴定 羊肉风波 2013年4月,江苏“羊肉风波” 假驴肉丑闻 2014年1月,山东沃尔玛假驴肉丑闻 ? 马肉风波 2013年1月,欧洲马肉风波 假比目鱼事件 2013年11月,非洲假比目鱼 火锅假肉门 2011年12月,河南火锅陷假肉门 假牛羊肉卷 2013年2月,辽宁假牛羊肉卷事件 假劣牛肉 内蒙古包头腾达食品有限公司制售假劣牛肉 毒鸡爪事件 2013年2月,贵州贵阳毒鸡爪事件 研 究 背 景 二、实验原理 细胞色素C氧化酶(cytochrome c oxidase,CO)是线粒体电子传递链的一个重要成员,在所有物种中均存在。 研究发现,细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因在大多数动物中有较明显的序列差异,因此可以利用COⅠ基因对肉制品进行物种鉴定。COⅠ基因也是建立物种DNA条形码的常用基因。 呼吸链各复合体在线粒体内膜中的位置 感官形态学方法 纹理、颜色、味道…… 理化方法 蛋白、免疫方法…… 基因序列分析和物种特异性PCR法 1.打开genbank,检索猪、牛、羊的COI基因组DNA序列,对比基因序列,查找非同源区域 三、实验步骤 Species Primer pair(5’-3’) Amplicon size (bp) Denaturing temperature 马 F1581 AACATGAAATACCATCTCATCC 124 58 马 R1700 TGAGGTTAATTCTACTGTAGAC 鼠 F1575 ACCACATGAAACACTGTCTC 128 58 鼠 R1702 GTTGAGGCATATGATACTGATA 山羊 F1543 CACGACGATACTCTGATTAC 157 58 山羊 R1699 GTGGTTAGGTCTACAGTTAG 犬 F1512 CCTCAACATTTCCTAGGTTTA 188 58 犬 R1700 GTAGTAAGTTCTACTATAGCAAC 鸡 F1450 ACCCATCATGAACCAAGGC 251 58 鸡 R1700 GGCAGTTAATTCGGGTTGG 猪 F1436 CGGGTACACACTCAACCAAG 268 58 猪 R1703 TGTGCTTGTCAGTTCTACTGC 水牛 F1387 CTGTGTTCGCCATTATAGGA 313 58 水牛 R 1699 GTGGTTAGATCTACGGTTGAG 1)在电子天平上称取200mg肉末放入碾钵,加入500 μlTE缓冲液,充分研磨成匀浆。(略) 2)用移液枪吸取匀浆200ul转移至1.5 ml离心管中,加入500μl细胞裂解液,上下颠倒30次,37℃水浴加热10分钟,加入50μl蛋白酶K,混匀,56℃水浴加热20分钟。 3)12000r/min离心10分钟,小心转移上清液至另一干净离心管,吸取600μl苯酚:氯仿:异戊醇,上下颠倒30次,12000r/min离心5min。 4)小心转移上清液至另一干净离心管,吸取等体积氯仿:异戊醇,上下颠倒10次,12000r/min离心5min。 5)小心转移上清液至另一干净离心管,吸取1倍体积的异丙醇,上下颠倒10次,12000r/min离心5min,弃上清。 6)吸取1ml 70%乙醇加入离心管,12000r/min离心5min。弃上清液,再次离心1min,吸去管内液体,开盖室温干燥2-5民。吸取50μl TE,充分吹打溶解沉淀,待用。 DNA提取

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