分子生物学2009-4推荐.ppt

在大肠杆菌编码S21-引物酶-RNA聚合酶σ因子的操纵子中也的类似情况。在这一多顺反子mRNA中，引物酶部分最不稳定（即降解最快）。据认为，这首先是由RNA内切酶在引物酶编码区和σ因子编码区之间切断，然后由外切酶从3′末端降解的结果，但S21和σ因子编码区的3′末端均有终止发夹结构，可以抵抗外切酶的作用，因而表现出相当大的稳定性。再加上S21基因与引物酶基因之间具有衰减子结构，因而细胞内核糖体蛋白S21、引物酶、RNA聚合酶σ因子拷贝数分别为20000、50和3000。 * 1.3.4 翻译的阻遏 转录水平的调控有阻遏和激活作用，那么在翻译水平的调控中是否也有类似的调控作用呢？研究发现大肠杆菌RNA噬菌体Qβ中的翻译有阻遏现象。Qβ噬菌体基因组包含有3个基因，从5′到3′方向依次为与噬菌体组装和吸附有关的成熟蛋白基因A、外壳蛋白基因和RNA复制酶基因。 * 当噬菌体感染细胞，RNA进入细胞后，这条正链RNA立即作为模板指导合成复制酶，并与宿主细胞中已有的亚基结合行使复制功能。但是Qβ正链RNA上此时已有不少核糖体，它们从5′向3′方向进行翻译，这无疑影响了复制酶催化的从正链的3′向5′方向进行的负链合成过程。 解决这个矛盾的办法便是由Qβ复制酶作为翻译阻遏物进行调节。 * 体外实验证明，纯化的复制酶可以和外壳蛋白的翻译起始区结合，抑制蛋白质的合成。由于复制酶的存在，核糖体便不能和起始区结合，但已经起始的翻译仍将继续下去，直到翻译完毕，核糖体脱下，与正链3′端结合的复制酶便开始了RNA的复制。 复制酶既能和外壳蛋白的翻译起始区结合，又能和正链3′端结合，那么这两个部位是否具有同源性呢？ 序列分析表明，这两区都有可能存在稳定的茎—环结构，而且环上都有CUUUUAAA序列，因此推测复制酶可以作为翻译阻遏物。 * 1.3.5 RNA高级结构对翻译的影响 以RNA噬菌体f2的RNA作为模板，在大肠杆菌无细胞体系中进行蛋白质合成时，合成的大部分是外壳蛋白，RNA聚合酶只占外壳蛋白的1/3。其它RNA噬菌体中也有同样的现象，进一步研究发现，在完整的f2RNA分子上，核糖体可以直接起始翻译外壳蛋白，但不能立即起始翻译RNA聚合酶，一定要在外壳蛋白翻译到一定程度时，才能开始翻译RNA聚合酶。 * 这是因为噬菌体的多顺反子RNA往往形成复杂的二级结构，只有第一个蛋白质合成的起始位点是暴露的，而其它蛋白质合成的起始位点都可能形成链内碱基配对。在第一个顺反子翻译成多肽的过程中，核糖体的移动破坏了后续顺反子的二级结构，使后一个顺反子的起始位点易于受核糖体“攻击”，形成起始复合物，翻译后一种蛋白质。 * 1.3.6 反义RNA对翻译的影响 反义RNA是指能与mRNA互补的RNA分子。反义RNA分子也对mRNA的翻译有调节功能。 大肠杆菌中与渗透性有关的外膜孔蛋白的调节是由ompB、ompC和ompF3个互不连锁的基因控制的。其中ompC和ompF是结构基因，编码两种蛋白质，而调节基因ompB实际上是由ompR和envZ两个基因所组成。 * envZ编码的蛋白质可能是外膜上的一种受体蛋白，能感受到培养基中渗透压的变化，并将此信息传递给细胞内的ompR蛋白，并通过它对ompC和ompF基因进行正控制。有意思的是，环境因素还能直接影响这两个结构基因的表达量。当环境中的渗透压升高时，ompF蛋白的产量下降，但ompC蛋白的产量上升，而两种蛋白质的总量则是恒定的。那么，它们是如何感受细胞渗透压的变化，如何控制翻译总量的呢？ * 对ompC和ompF基因的核苷酸序列分析发现，离ompC基因5′端不远处，存在另一个转录单位（反方向的-10和-35区）。当培养基中渗透压升高时，ompC启动子介导了双向转录，除转录ompC基因外，还可以反向转录，生成一个174核苷酸的RNA。这个转录产物与ompF mRNA 5′端有较强的同源序列，可通过分子间杂合抑制ompF mRNA的翻译。 * 现在把这段174核苷酸序列称为micRNA（mRNA—interfering complementary RNA），由于它干扰ompF基因mRNA的翻译，所以编码micRNA的基因称为micF。 另外，在研究Tn10转座子的调节机制时，也发现类似于反义RNA的互补小分子RNA。 * Tn10转座子的两端各有一个插入序列IS10。转位酶是由这一序列编码的，转位活性主要存在于右侧的插入序列中，转位酶的启动部位有两个启动子：其一，转录转位酶mRNA；其二，反方向转录micRNA，两者的5′重叠40个核苷酸，因此可形成碱基配对。micRNA与转位酶mRNA结合后，即可抑制转位酶的合成，从而抑制转位活性。 * 反义RNA对基因表达调节机制的发现不仅具有重大的理论意义，而且为这人类控制生