诺丽Actin基因片段克隆和实时荧光定量PCR方法建立.PDF

第38 卷 第2 期 中南林业科技大学学报 Vol. 38 No. 2 2018 年2 月 Journal of Central South University of Forestry Technology Feb. 2018 Doi:10.14067/ki.1673-923x.2018.02.003 http: // 诺丽 Actin 基因片段克隆及实时荧光 定量PCR 方法的建立 1 2 3 吴 田 ，蓝增全 ，王华芳 （1. 西南林业大学 园林学院，云南 昆明 650224 ；2. 西南林业大学 环境科学与工程学院，云南 昆明 650224 ； 3. 北京林业大学 生物科学与技术学院，北京 100083 ） 摘 要：为了解决诺丽实时荧光定量PCR （qRT-PCR ）检测中无内参基因的现状，根据其他植物Actin 基因的保 守序列设计一对简并性引物，以诺丽果实总RNA 反转录成cDNA 为模板，进行PCR 扩增，扩增出的基因片段 克隆到pMD-18T 载体，阳性克隆经PCR 鉴定后测序。序列结果表明：该片段长393 bp，编码131 个氨基酸； 所得序列与麦蓝菜actin 1 有最高的一致性（96% ）和相似性（98% ）。qRT-PCR 结果表明，诺丽Actin 基因在诺 丽的各个组织、果实不同发育时期都能稳定表达，且表达水平基本一致，适合在诺丽基因表达研究中作为内参 基因。 关键词：基因克隆；内参基因；序列分析；表达分析 中图分类号：S718.46 文献标志码：A 文章编号：1673-923X(2018)02-0016-07 Cloning and development of real-time fluorescence quantitative PCR assay of Actin gene fragment from Noni 1 2 3 WU Tian , LAN Zengquan , WANG Huafang (1.College of Horticulture and Gardening, Southwest Forestry University, Kunming 650224, Yunnan, China; 2.College of Environment Science and Engineering, Southwest Forestry University, Kunming 650224, Yunnan, China; 3. College of Biological Science and Technology, Beijing Forestry University, Beijing 100083, China) Abstract: In order to solve the problem of the lack of reference control gene in real-time fluorescence quantitative PCR (qRT-PCR) of noni, the