应用二次回归正交旋转组合设计优化果胶酶发酵条件食品科学与工程.doc

目 录 前言 - 2 - 1 材料与方法 - 4 - 1.1材料 - 4 - 1.2仪器设备 - 4 - 1.3试验方法 - 4 - 1.3.1发酵条件优化 - 4 - 1.3.2验证试验 - 5 - 2 结果与讨论 - 6 - 2.1产酶条件优化 - 6 - 2.2五元二次回归方程的建立及检验 - 7 - 2.3试验因子间交互作用分析 - 7 - 2.4发酵条件的优化及验证 - 9 - 3 结论 - 9 - 参考文献 - 10 - Abstract - 11 - 致谢 - 11 - 应用二次回归正交旋转组合设计优化果胶酶发酵条件 摘要：本试验通过五元二次回归正交旋转组合设计对果胶酶的发酵条件进行了优化，并建立了其产酶性能优化条件的数学回归模型。试验结果表明：碳源与发酵培养基初始pH，碳源与温度，表面活性剂与温度的互作效应对菌株产酶效果影响显著。菌株的最适发酵碳源浓度1.434%；发酵氮源浓度0.6%；表面活性剂浓度0.01%；发酵初始pH4.03；发酵温度41.3℃，在此条件下菌株产酶活性可以达到11174 u/mL。 关键词：果胶酶 正交旋转组合 发酵条件优化 前言 果胶质(pecticsubstance)是植物产生的结构性多糖，广泛存在于高等植物的组织中，尤其是水果和蔬菜组织的细胞间质和细胞初生壁中。果胶质属异多糖(heteropolysaceharides)，分子量在30kDa～300kDa，主要由(1-4)-α-D-半乳糖醛酸(D-galacturonan)经α-1,4糖苷键连接成直链状聚合物，部分(1-4)-α-D-半乳糖醛酸上的羧基可与甲醇酯化形成甲酯[1]。果胶(pectin)即为甲酯化的多聚半乳糖醛酸物质(polalaeturonieaeids)，其分子中约75%羧基是被甲酯化的。果胶按其分子中D-半乳糖醛酸上羧基的酯化程度不同，可分为低甲酯果胶(酯化度25%～50%)和高甲酯果胶(酯化度50%～80%)[2]。 果胶酶(pectinases）是指能分解果胶质的多种酶的总称，不同来源的果胶酶其特点也不同，微生物来源的果胶酶主要有聚半乳糖醛酸酶(PG)，聚半乳糖醛酸裂解酶(PGL)、聚甲基半乳糖醛酸裂解酶(PMGL）和果胶酯酶(PE) [3] 。PG在果胶酶系中发现较早，它可以水解D-半乳糖醛酸-1,4糖苷键，产物为单半乳糖醛酸和二半乳糖醛酸；PGL通过切断果胶分子-1,4糖苷键，生成具有不饱和键的半乳糖醛酸酯；PMGL可以切断果胶分子-1,4糖苷键，产物为2～8个糖醛酸单位的不饱和甲基半乳糖酸低聚物；PE能使果胶中的甲酯水解，生成果胶酸和甲醇[4]。 果胶酶的应用十分广泛。例如可降低果汁粘度，澄清果汁果酒，从而保持产品的稳定性，同时，果胶酶还可保持果粒的完整性；有些果蔬榨汁较困难，若先用果胶酶处理，可使果蔬汁粘度下降，有利于过滤和浓缩，提高出汁率，改善成分[5]；果胶酶还可以应用于水果和蔬菜的浸解、液化，生产单细胞果蔬汁；果胶酶还可用于果实脱皮。由于含有纤维素酶和半纤维素酶的粗果胶酶制剂能作用于果实皮层，使细胞分解而脱落。橘子囊衣、莲子内皮和大蒜膜层经果胶酶处理后可以很快脱落[6]；砍伐后的木材常对防腐剂如杂酚油或铜一铬一硼的处理有抗性。经果胶酶制剂或产果胶酶细菌处理后，木材的通透性增加，从而加强了防腐剂的使用效果；麻类植物中除含有纤维素、果胶半纤维素、木质素等，还含有胶类物质即非纤维类物质，占麻类成分的20～30%，纺织时须去除。常用的化学脱胶法操作条件较复杂，且会产生大量废水。我国土法脱胶就是将麻浸入池塘或河沟，利用存在于麻类植物本身或水中的细菌等微生物产生的果胶酶分解果胶[7]。此外，果胶酶还可应用于棉织物精炼加工。T.Sakai (1988)等人发现碱性果胶酶可使原果胶水解成为可溶于水的高聚合度的果胶分子，从而开发了一种针对棉织物精练的生物化学工艺，并称之为生物精练(Bioseouring)[8]。 国内对果胶酶的研究始于20世纪60年代。八十年代以来我国学者对果胶酶菌种选育进行了大量的研究。杨天波等以碳黑曲霉(A.carbonarius) Asp.3.396为出发菌株，对孢子悬液进行紫外线和高能电子辐射复合处理，获得产酶能力提高的白色孢子突变株[9]。崔福绵等以0.03%亚硝基胍处理黑曲霉(A.niger)cp-831，获得高产果胶酶突变株cp-85211，此菌株在无锡酶制剂厂通过了中试，作为生产菌株进行批量生产[10]。据杜国军等报道，以黑曲霉(Aspergillus niger) HY为出发菌株，进行紫外线诱变突变株HY-D3，其产酶遗传特性稳定，果胶酶产量可达2000U/g干基以上，比出发菌株提高了1倍[11]。国外对果胶酶的研究较多，Kashyap等人从土壤中分离的Bacill