minutetm质谱总蛋白提取试剂盒-英文特生物技术北京.pdfVIP

Invent Biotechnologies, Inc. Minute TM 质谱总蛋白提取试剂盒 目录号MS-026 描述： 质谱分析已经成为蛋白质分析和鉴定的常用方法。传统的总蛋白提取方法，例如 RIPA 缓冲液蛋白提取存在 着提取蛋白不完整的问题，并且RIPA buffer 中的某些成分不能兼容下游应用实验。我们开发的Minute TM 质 谱总蛋白提取试剂盒可以克服这些问题，该试剂盒可以快速高效从动物细胞或组织中提取完整的总蛋白，无 偏差。提取的蛋白质兼容胰酶消化，iTRAQ 标记和生物素标记。由于使用离心管柱专利技术提取，提取量小 可低至20ul ，最大可达500ul。这个特有的特性可以有效解决起始材料不足的问题。总蛋白可以被快速提取， 产量高达2-8mg/ml。 应用： 该试剂盒能有效的提取总蛋白，可应用于胰酶消化后的质谱分析，iTRAQ ，生物素标记和其他应用。 试剂盒组分 1. 25ml 裂解液 2. 50 个离心管柱 3. 50 个收集管 4. 4 根塑料研磨棒 运输与储存 ： 运输常温，储存于室温 重要产品信息 试剂盒可快速提取总蛋白，蛋白酶抑制剂可选择性加入，但是如果下游实验需要较长时间或者蛋白提取后保 存较长时间，建议添加蛋白酶抑制剂。推荐使用BCA 试剂盒用于蛋白浓度测定。研究蛋白磷酸化，磷酸酶抑 制剂应在使用前加入裂解缓冲液。 1 Tel ：4006468368 Email ：support@ 英文特生物技术（北京）有限公司 Invent Biotechnologies, Inc. 所需附加材料 1XPBS 涡旋震荡仪 台式离心机 BCA 蛋白定量试剂盒（Pierce, Cat # :23227） 冷丙酮 操作方法： 细胞样品总蛋白提取 A ．非贴壁细胞 1.将离心管柱及接收管套管放在冰上预冷。 2.低速离心收集细胞，在 1.5ml 离心管中加入预冷的PBS ，旋窝震荡,3000rpm 离心2-3 分钟清洗两次细胞。吸 去上清，剩余与细胞体积相同体积的PBS 。涡旋震荡重悬细胞。 3.加入表格1 中相应体积的细胞裂解液，涡旋震荡裂解细胞。 4.将裂解的细胞转移到预冷的离心管柱套管中，14000-16000rpm 离心30 秒取出 5.立刻将收集管放置于冰上，弃去离心管柱，蛋白提取完成可应用于下游实验。 6.加入6X 的冷丙酮（1 倍体积蛋白溶液+6 倍体积丙酮，储存于-20 oC）。混匀，在-20℃孵育至少1 小时到过 夜（蛋白浓度＜1mg/ml 时推荐过夜孵育）。 o 7.孵育后，台式离心机最高速度（14000-16000rpm），4 C 离心10-15 分钟。弃掉上清液，让其在空气中干燥。 沉淀即为提取的总蛋白。可根据下游实验用不同的缓冲液溶解沉淀。（见下方） 表格1 ，不同细胞体积应加入相应体积裂解液 细胞体积（ul） 裂解液（ul） 6 相当细胞量# X 10 3 20 0.3 5 50 0.5 10 100 1 20 200 2 40 500 3 6 ﹡NIH3T3 和293T 细胞10ul 体积相当于1X10 个细胞