第七章 微生物的遗传和变异推荐.pptVIP

基本方法 培养基传代培养 低温 干燥 斜面、平板 液氮、低温冰箱 砂土管、冷冻真空干燥 生活态 休眠态 寄主保藏 寄生性微生物 低氧 石蜡油、橡皮塞密封、琼脂柱穿刺 * 表 几种常用菌种保藏方法的比较 *用斜面或半固休穿刺培养物均可。一般置4℃冰箱保藏。 **石油发酵微生物不适宜。 方 法 名 称 主 要 措 施 适 宜 菌 种 保 藏 期 评 价 冰箱保藏法 （斜面） 低温（4℃） 各大类* 3-6月 简 便 冰箱保藏法 （半固体） 低温（4℃）,避氧 细菌，酵母菌* 6-12月 简 便 石蜡油封藏法 低温（4℃）,缺氧 各大类** 1-2年 简 便 砂土保藏法 干燥，无营养 产孢子的微生物 1-10年 简便有效 冷冻干燥保藏法 干燥，无氧，低 温，有保护剂 各大类 5-15年以上 繁而高效 液氮保藏法 超低温（－196℃）, 有保护剂 各大类 15年以上 繁而高效 甘油悬液保藏法 低温（－70℃），保护剂甘油 细菌，酵母菌 约10年 较简便 * 由于微生物的多样性，不同的微生物往往对不同的保藏方法有不同 的适应性，迄今为止尚没有一种方法能被证明对所有的微 生物均适宜。因此，在具体选择保藏方法时必须对被保藏菌株的 特性、保藏物的使用特点及现有条件等进行综合考虑。对于一些比 较重要的微生物菌株，则要尽可能多的采用各种不同的手段进行保 藏，以免因某种方法的失败而导致菌种的丧失。 * 思考题 2、如何设计实验对三种细菌基因重组的途径进行区分？ 作 业 1、在噬菌体浸染试验中，如何将同位素如S35标记到噬菌体的蛋白质外壳中? 2、在涂布实验中，为什么涂布后再接种噬菌体的那一组大肠杆菌抗噬菌体的菌落数目要多得多? 3、在大肠杆菌结合试验中，为什么要选择多重营养缺陷型突变株? 1、在证明基因突变的“非对应性”的特点的三个经典实验中，那个实验可以用来筛选营养缺陷型突变体菌株？并设计实验筛选大肠杆菌的维生素B1（thi-）营养缺陷型菌株 * 溶源转变（lysogenic conversion）P75 一个与转导相似又不同的现象 温和噬菌体感染细胞后使之发生溶源化，因噬菌体的基因整合到宿主染色体上，而使后者获得了新性状的现象。 溶源转变与转导的不同？ a）发生溶源转变的噬菌体携带不携带供体菌的基因？ b）发生溶源转变的噬菌体是完整的，还是缺陷的？ c）新获得的性状是什么细胞？而不是什么细胞？ d）所获得形状稳定不稳定？ P75 * （三）、接合 (conjugation) 1.实验证据 2. 机制 细菌接合作用的特点及过程 通过细胞与细胞的直接接触而产生的遗传信息的转移和重组过程 * 通过细胞与细胞的直接接触而产生的遗传信息的转移和重组过程 实验证据 1946年，Joshua Lederberg 和Edward L.Taturm细菌的多重营养缺陷型杂交实验 * 中间平板上长出的原养型菌落是两菌株之间发生了遗传交换和重组所致！ 为何采用多重营养缺陷型菌株？ 多重营养缺陷型菌株 * 证实接合过程需要细胞间的直接接触的“U”型管实验： 排除转化和转导 * 2、机制 大肠杆菌的接合机制 接合作用是由一种被称为F因子的质粒介导； F因子的分子量通常为5×107，上面有编码细菌产生性菌毛（sex pili）及控制接合过程进行的20多个基因 * 3、菌毛(pili,单数pilus) 性菌毛构造和成分与菌毛相同，但比菌毛长，数量仅一至少数几根。 性菌毛一般见于革兰氏阴性细菌的“雄性”菌株（即供体菌）中，其功能是向 “雌 性”菌株（即受体菌）传递遗传物质。有的性菌毛还是RNA噬菌体的特异性吸附受体。 （二）、细菌细胞的特殊结构 P26 * F因子为附加体质粒既可以脱离染色体在细胞内独立存在，也可插入（整合） 到染色体上 * 机 制 “雄性”（F+），有性菌毛 “雌性”（F-），无性菌毛 * F因子的四种细胞形式 b）F+ ；（ F因子独立存在，有性菌毛）。 c）Hfr；F因子插入到染色体DNA上，有性菌毛。 d）F′；F因子因不正常切割而脱离染色体时， 形成游离的但携带一小段染色体基因的F因子。 细胞表面同样有性菌毛。 a） F- ； （“雌性”菌株，无性菌毛） “雄性”菌株 * （1） F+×F-杂交 杂交的结果：给体细胞和受体细胞均成为F+细胞 理化因子的处理可将F因子消除而使F+菌株变成F-菌株 F+菌株的F因子向F-细胞转移，但含F因子的宿主细胞 的染色体DNA一般不被转移。 * * Hfr菌株的F因子插入到染色体DNA上，因此只要发生接合转移转移过程，就可以把部分甚至全部细菌染色体传递给F-细胞并发生重组，由此而得名为 高频重组菌株 （2）Hfr ×F-杂交 Hfr菌株