利用抗原结合多肽嫁接抗体技术制备抗hCG单域抗体.PDFVIP

生 物 工 程 学 报 彭静 等/利用抗原结合多肽嫁接抗体技术制备抗 hCG 单域抗体 569 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn Apr. 25, 2018, 34(4): 569−577 DOI: 10.13345/j.cjb.170372 ©2018 Chin J Biotech, All rights reserved ·医学与免疫生物技术· hCG 彭静，王琼，程小玲，刘梦雯，王美，辛化伟 430065 , , , . hCG . , 2018, 34(4): 569–577. Peng J, Wang Q, Cheng XL, et al. Preparation of anti-hCG single domain antibody by antibody grafting technique using an antigen-binding peptide. Chin J Biotech, 2018, 34(4): 569–577. 摘 要: 本研究旨在人绒毛膜促性腺激素 (hCG) 的结合多肽的基础上应用嫁接抗体技术制备抗hCG 单域抗体， 简化单域抗体制备过程，提高多肽生化稳定性。利用单域抗体通用骨架 (cAbBCII10) ，以 hCG 结合多肽取代互 补决定区CDR1 或CDR3 ，合成cAbBCII10 嫁接抗体全基因序列并与 sfGFP 基因序列融合后，插入到带有His 标 签的原核表达载体pET30a(+) 中，成功构建了pET30a-(His6)-cAbBCII10-CDR1/hCGBP1-sfGFP 与pET30a-(His6)- cAbBCII10-CDR3/hCGBP3-sfGFP 融合蛋白表达质粒。将重组质粒转化大肠杆菌BL21 (DE3) ，用IPTG 诱导表达 融合蛋白，得到高表达量的可溶性融合蛋白。利用Ni-NTA 亲和柱纯化得到纯蛋白，应用SDS鉴定纯化的 蛋白为正确表达的目标蛋白。通过抗原抗体结合实验，发现 hCG 结合多肽嫁接到单域抗体通用骨架的互补决定 区CDR1 或CDR3 后都有抗原结合活性，具有相似的抗体滴度，且嫁接到CDR3 后的抗原结合活性比CDR1 要高 (2–3 倍) 。嫁接抗体基本保留了所用单域抗体框架较为稳定的生化特性，具有一定的热稳定性和较好的碱耐受性， 同时，所接入的hCG 结合片段对hCG 具有较特异的结合活性，为进一步优化抗原结合多肽嫁接抗体技术制备抗 hCG 单域抗体提供了可靠的实验基础。 : hCG ，单域抗体，嫁接抗体，CDR1 ，CDR3 ，融合蛋白，表达纯化 Received: September 21, 2017; Accepted: December 27, 2017 Supported by: National Natural Science Foundation of China (No.. Corresponding authors: Huawei Xin. Tel: +86-27 E-mail: xinhuawei@ (No. 2018-01-10 /kcms/detail/11.1998.Q0849.002.html 570 ISSN 1000-3061 CN 11-1998/Q Chin J Biotech Preparation of anti-hCG single domain antibody by antibody grafting technique using an antigen-binding peptide Jing Peng, Qiong Wang, Xiao