第十四章生殖工程——试管婴儿推荐.pptVIP

* * * 影响ICSI 成功的主要因素 ICSI 成功与否主要看受精、卵裂及妊娠率，除技术因素外，径自、卵子状态及卵子激活等都直接影响其成功。 ① 显微操作技术对ICSI 的影响 体外操作过程不超过5分钟 注射针内径5~8微米之间 固定针外径120微米，内径15~40微米 ② 精子状态对ICSI的影响 * 影响ICSI 成功的主要因素 ③ 卵子对ICSI的影响 卵子状态 卵母细胞成熟程度 女性年龄影响卵子质量 卵子激活 以放出第二极体、形成雌雄原核为标志并最终启动卵子代谢的一系列变化 * ICSI的风险与出生缺陷 与ICSI操作无关 卵巢过度刺激综合征、多胎妊娠、异位妊娠 与ICSI操作有关 基因缺陷垂直传播 外源DNA污染 * 三、细胞核移植技术----第四代试管婴儿 （一）、概论 什么是克隆？ 　“clone”：单性生殖，本意是指通过无性形式　　由单个细胞产生的和亲代非常相似的后代。 动物克隆：指一个动物经无性繁殖或孤雌生殖而产生的 多个后代，克隆的所有成员遗传物质完全相同。 * 人有无自然单性生殖？ 古代传说：轩辕黄帝之母“感电光绕头而有娠”，生黄帝 1955年，Spuwary,相信人类有单性生殖 至今尚无一例经得起严格的科学检验 生物进化证明：有性生殖是从无性生殖发展而来，刻意对人进行无性生殖意味着退化！ * 细胞核移植 是指将发育不同时期的胚胎或成体细胞核经显微手术和细胞融合方法移植到去核卵母细胞中，或将体细胞核直接注入去核卵母细胞中，重新组成胚胎并使之发育成子代个体。 克隆技术之所以引人关注，是因为它在医疗和畜牧业方面有深远意义 * 克隆研究大事记 1938年，德国科学家Spemann首次提出动物细胞克隆设想 1952年，美国学者Briggs和King首先在青蛙身上进行克隆实验 1970年，克隆青蛙取得突破进展 1981年，胚胎克隆鼠成功 1984年， 胚胎克隆羊成功 * * 克隆研究大事记 1994年，用发育120个细胞阶段的胚胎细胞核移植成功，获得克隆牛 1997年，英国Wilmut体细胞克隆羊成功 “多莉” 1998年，英国PPL医疗公司，克隆牛“弗逊先生” 1998年，克隆鼠克隆出克隆鼠 1999年，美国克隆第一只雄性鼠 2000年，美国牛耳皮细胞克隆6头牛 2001年，美国克隆出第一个灵长类动物恒河猴 * * 二、哺乳动物细胞核移植方法 （一）重构卵的形成 1、供体细胞和受体细胞的选择和处理 供体细胞：即细胞核的来源 早期胚胎细胞、干细胞、体细胞 受体细胞：提供去除核后的只含有细胞质的 细胞 MII期卵母细胞、受精卵、融合后2细胞胚 * 2、细胞核移植 包括受体细胞核去除和供体细胞核移入 受体细胞核的去除 移核 带下移植 胞质内注射 * * 细胞融合 融合方法：化学融合、病毒融合、电融合 电融合：通过外加脉冲电场来改变细胞膜通透性，从而促进膜内外物质交换，当细胞膜紧密接触时，电击可以使接触膜上形成孔洞，导致细胞融合。 融合液：0.27mol/L蔗糖液、甘露醇溶液 电融合方法 * （二）重构卵的活化处理 一般电融合完成后，卵子因电刺激而被激活，但也有的核移植重构卵还需进一步充分激活才能发育。 应用较多的化学激活剂有7%乙醇、离子霉素、星形孢菌素等 * * （三）移核胚的体外培养和胚胎移植 与IVF-ET相同 体外培养一段时间观察发育能力 将胚胎输入输卵管或子宫 克隆动物诞生 * * （四）影响核移植的一些因素 受体因素 卵母细胞胞浆 卵母细胞活化时间 卵母细胞年龄：不成熟或老化 卵母细胞去核时去掉胞浆的多少 * 四）影响核移植的一些因素 供体因素：供体核是克隆的主体，而受体无核胞浆只是提供发育的一个环境，因此供体细胞是影响核移植胚发育的更关键因素。 供体细胞的种类、分化程度和其所处细胞周期均影响核移植胚发育。 * （五）提高核移植成功率的方法 选用MII期卵母细胞，在移植操作完成之后，避免或减少对卵母细胞的刺激，防止过早活化。在操作完成一段时间后再用适当的刺激使卵母细胞活化。 供体细胞选择分化程度低的胚胎细胞和胎儿细胞并且处于G1或Go 期细胞，克隆成功率较高。 * （六）核移植实验结果的检测 为了保证核移植实验结果的可靠性， 有必要对实验结果进行验证性检验。