大蒜内生菌的分离及拮抗菌株的筛选与鉴定-江苏农业科学.PDFVIP

江苏农业科学　２０１８年第４６卷第５期 — ９７— 李乐溪，李　丹，张　亮，等．大蒜内生菌的分离及拮抗菌株的筛选与鉴定［Ｊ］．江苏农业科学，２０１８，４６（５）：９７－１０１． ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０１８．０５．０２６ 大蒜内生菌的分离及拮抗菌株的筛选与鉴定 李乐溪，李　丹，张　亮，王军娟，杨绪勤，蒋继宏 （江苏师范大学生命科学学院／江苏省药食植物生物技术国家重点实验室培育点，江苏徐州２２１１１６） 　　摘要：采用组织切块法和组织匀浆法对１０种采集自全国不同地区的大蒜进行内生菌的分离，并用平板对峙法对 分离得到的内生菌抗菌活性进行了筛选，根据形态学和１６ＳｒＲＮＡ等方法对有抗菌活性的菌株进行了鉴定。试验结果 表明：从１０种大蒜鳞茎中共分离得到大蒜内生菌１０２株，采用平板对峙法筛选出能同时抑制５种及以上植物病原真 菌的菌株，再对筛选出的菌株进行１６ＳｒＲＮＡ测序鉴定菌种，去除重复的菌株后，得到１９株抑菌活性较强的菌株。对 １９株大蒜内生菌进行一系列生理生化指标的检测，结果表明这些菌株的形态及生理生化特征均不相同。 　　关键词：大蒜；内生菌；拮抗；鉴定；抑菌活性；生物防治 ＋ 　　中图分类号：Ｓ４８２．２９２　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１８）０５－００９７－０５ 　　植物内生菌普遍存在于植物组织内部，既能与宿主植物 对多种细菌、真菌具有很强的杀伤、抑制作用，大蒜所含挥发 保持良好关系又不会引起宿主植物的病害，也不会改变宿主 性物质、大蒜汁及大蒜素对多种危害人体健康的病原菌有拮 ［８］ 植物的表型特征和功能。内生菌来自于宿主植物，并能在植 抗作用 ，因此，大蒜被誉为“天然广谱杀菌剂”，具有很高的 物体内发挥一系列生防功效。许多植物内生菌能产生丰富的 经济价值、营养价值和医疗保健价值，在各个方面有着广泛应 次级代谢产物，而且具有多种生物活性，如杀菌、杀虫、抗病 用。本研究以１０种采集自全国不同地区的新鲜大蒜为样品 ［１－２］ 毒、抗肿瘤、抗氧化和促生长等 。基于目前大量的研究， 进行内生菌分离，共分离得到１０２株大蒜内生菌，通过抑菌活 植物内生菌显示出了许多有益的生物学作用，因此植物内生 性试验，从中筛选出具有拮抗作用的菌株，通过革兰氏染色试 菌作为一种新兴的微生物资源成为了国内外研究的热点。 验、产生物被膜、淀粉酶活性和纤维素酶活性试验，以期获得 植物病害，尤其是由病原真菌引起的病害，一直是农林业 大蒜内生菌的基本信息，为植物病虫害的生物防治提供新的 生产中的棘手问题，给人类造成了巨大的经济损失。长期以 菌种资源。 来，人们认为用化学农药解决植物病虫害是最有效的办法，但 １　材料与方法 化学农药也会带来许多危害。目前，人工合成的化学农药已 有５００余种，这些农药的广泛使用，不仅造成了严重的环境污 １．１　材料 染，也对人类以及动植物健康构成危害。然而，利用植物内生 １．１．１　供试植物　以１０种采自江苏徐州、山东金乡、云南大 菌对植物病害进行生物防治的研究已相当普遍。何红等从辣 理、湖南常德和甘肃陇南等不同地区的大蒜种植基地、农民菜 椒中分离筛选出２株内生枯草芽孢杆菌，研究表明这２株菌 园的新鲜大蒜为样品。 对辣椒、白菜、香蕉等植物炭疽病具有良好的防治效果［３－５］； １．１．２　目标菌株　茄链格孢（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａｓｏｌａｎｉ）、辣椒枝孢 吴海燕等研究了大豆根瘤内生菌次级代谢产物对大豆胞囊线 （Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍｃａｐｓｉｃｉ）、稻梨孢菌（Ｐｙｒｉｃｕｌａｒｉａｏｒｙｚａｅ）、白腐小 ［６］