医院感染病原微生物鉴定及其耐药机制检测精选.ppt

* (2).琼脂稀释法 筛选试验：苯唑青霉素耐药 培养基：含NaCL的M-H琼脂（4%W/V；0.68mol/l） 抗生素含量：6μg /ml苯唑青霉素或10μ g/ml甲氧西林 接种：直接菌落悬液约0.5麦氏比浊管，用拭子浸润菌悬液后，在平板表面点种或划线。 培养条件：35℃空气 培养时间：24小时，对于甲氧西林/苯唑青霉素耐药的凝固酶阴性葡萄球菌，孵育48小时后再检测最可靠。 结果：1菌落=耐药 推荐质控菌：金黄色葡萄球菌ATCC29213—敏感，金黄色葡萄球菌ATCC43300-耐药 * 目前治疗方案：MRS轻度感染 ：利福平、SMZ-TMP、环丙沙星；严重感染：万古霉素。对万古霉素耐药的金黄色葡萄球菌称之为VRSA Vancomycin-risistant S.aureus 只能用链阳霉素治疗。目前金黄色葡萄球菌对万古霉素耐药尚不多见，国外学者将肠球菌耐万古霉素基因转移到金黄色葡萄球菌中已获得成功；日本、香港散在报道且仅万古霉素低度耐药（MIC8μ g/ml），且国际上尚未承认；2002年6月美国从一40岁患有糖尿病、慢性肾脏衰竭患者导管中分离到对苯唑青霉素MIC 16μ g/ml,对万古霉素MIC128μ g/ml的耐万古霉素的金黄色葡萄球菌，VRSA就在我们眼前。 * 2.肠球菌的检测： 肠球菌是一种重要的病原微生物，实验室应做高耐庆大霉素肠球菌的检测。若高耐庆大霉素，则不能和作用细胞壁的药物（如氨苄西林、青霉素、万古霉素）协同使用。 有条件的实验室还应作Van A,Van B,Van C耐药基因监测。治疗原则：Van A：青霉素敏感（S），氨基糖苷类非高耐--青霉素+庆大霉素；青霉素耐药（R），氨基糖苷类非高耐--青霉素/头孢类+壁霉素+庆大霉素。Van B：氨基糖苷类非高耐株--壁霉素+庆大霉素。氨基糖苷类高耐株--壁霉素，新生霉素+氟喹诺酮类。多重耐药的肠球菌目前尚无有效的治疗方案。 * * （2）．肠球菌高水平氨基糖苷类耐药和万古霉素耐药筛选试验（琼脂稀释法） 筛选试验 庆大霉素HLAR 抗生素含量： 500ug/ml 接种： 液体生长法或直接菌落法至 0.5麦氏比浊管。琼脂-10ul0.5麦氏比浊管悬液点种在琼脂表面。 孵育条件 35℃空气 孵育时间 24小时 结果：琼脂：1菌落=耐药；肉汤：任何生长=耐药,耐药-不能和作用细胞壁的药物协同（如氨苄西林、青霉素、万古霉素），敏感-可以和敏感的作用于细胞壁的药物协同（如氨苄西林、 青霉素、万古霉素）。 质控菌株：粪肠球菌ATCC29212-敏感；粪肠球菌ATCC51299-耐药 * 筛选试验 链霉素HLAR 抗生素含量： 肉汤1000ug/ml 、 琼脂2000ug/ml 接种：肉汤-推荐标准肉汤稀释法。 液体生长法或直接菌落法至 0.5麦氏比浊管。 琼脂-10ul0.5麦氏 比浊管悬液点种在琼脂表面。 孵育条件： 35℃空气 孵育时间：24-48小时（如孵育24小时为敏感时，需继续孵育） 结果：琼脂：1菌落=耐药；肉汤：任何生长=耐药,耐药-不能和作用细胞壁的药物协同（如氨苄西林、青霉素、万古霉素），敏感-可以和敏感的作用于细胞壁的药物协同（如氨苄西林、 青霉素、万古霉素）。 质控菌株：粪肠球菌ATCC29212-敏感；粪肠球菌ATCC51299-耐药 * 筛选试验： 万古霉素耐药 抗生素含量： 6ug/ml 接种：肉汤-推荐标准肉汤稀释法。 液体生长法或直接菌落法至 0.5麦氏比浊管。1-10ul0.5麦氏 比浊管悬液点种在琼脂表面。 孵育条件 ：35℃空气 孵育时间 ：24小时 结果： 1菌落=耐药 进行万古霉 素MIC测定 和动力试验产生的色素来区别获得性耐药 （VanA,VanB） 和那些对万古霉素天然的中 水平耐药（VanC） 如敦鸡肠球菌、铅 肠球菌和黄肠球菌， 它们通常在万古霉素 筛选平板上生长。 质控菌株：粪肠球菌ATCC29212-敏感；粪肠球菌ATCC51299-耐药 * 3.超广谱β –内酰胺酶检测： 超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）是大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯氏菌等革兰氏阴性杆菌在抗生素选择压力下产生。它是质粒介导的对第一、二、三头孢菌素、氧亚氨基β-内酰胺抗生素耐药，有时尽管体外试验是敏感的，是β-内酰胺酶基因Tem-1,Tem-2,SHV-1突变而来。 ESBLs编码基因在质粒上，易在不同菌株间播散，表现为多重耐药。目前将ESBLs分为TEM型、SHV型、OXA型、CTX-M型。共