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制浆造纸工程专业毕业论文 [精品论文] 白腐菌漆酶的生产及其在制浆预处理和造纸废水脱色处理中的应用 关键词：采绒革盖菌 漆酶 造纸废水 脱色处理 废水处理 制浆预处理 中水回用 摘要：漆酶（Laccase，EC）是白腐菌降解木质素酶系中的重要酶之一，具有高氧化还原电位、不需要H2O2启动而以O2为电子受体，因而具有比其他几种木质素氧化酶更实际的应用价值。 论文首先从液体培养体系出发，探索不同培养条件对白腐菌分泌漆酶的影响。液体培养体系下，白腐菌产漆酶的最佳条件是缓冲体系起始pH6.0、摇瓶转速为180 rpm、装液量为100 mL/500 mL。在所有测试碳源中，葡萄糖为最佳碳源，在二糖中以蔗糖为碳源，漆酶酶活相对较高，而多糖如淀粉不利于漆酶的生产。在所有测试氮源中，硝酸氨和酒石酸氨组合为最佳氮源，氯化铵和尿素的效果次之，蛋白胨的效果最差。当C/Namp;gt;10：1即高碳低氮培养条件下，??利于漆酶的形成。芳香化合物诱导剂ABTS浓度为0.5-1 mM时，对漆酶的生产影响最明显，与限氮培养基中产酶相比可提高酶活6倍，约为1.6 IU/ml；0.5 mM愈创木酚、1 mM阿魏酸、0.05 mM二甲基苯胺的添加也明显提高酶活，约提高2-2.5倍；0.01 mM黎芦醇的添加可提高约1.6倍。 在液体培养基中添加天然成分促进白腐菌的生长，通过实验发现，在液体培养基中添加木粉、玉米芯、土豆浸出液，对于白腐真菌菌丝球产量提高有明显的促进作用。在外加碳源为10 g/L葡萄糖的条件下，经过10 d培养，添加浸出液的培养基的小球产量均能够达到80 g/L以上，是未添加浸出液的基础培养基的小球产量的5倍。在外加碳源为5 g/L葡萄糖时，添加了外源天然浸出液后，10 d后小球产量均能达到69.5 g/L以上，在未添加任何浸出液的基础培养基中，小球产量很低，并且在葡萄糖浓度2 g/L～20 g/L时，10 d产量在12.5 g/L～14.5 g/L范围内。木材浸出液对采用培养基培养菌丝小球的作用是刺激生长，并不是提供生长所需要的有机物。 利用漆酶在蒸煮前对原料进行预处理，研究漆酶预处理对麦草蒸煮性能和成浆物理性能的影响。结果表明：预处理最适条件为pH值5.0，温度40℃，液比1：6，时间4h，酶用量30 IU/g。在上述适宜条件下预处理后浆料得率提高5.46个百分点，Kappa值下降了2.6。裂断长、撕裂指数和白度分别提高25.55％、43.71％、4.6％SBD。 本研究对白腐真菌（Coriolus versicolor）漆酶对木素的絮凝能力进行了研究，探讨了培养因子对漆酶产量的影响，结果发现该菌产漆酶的最适初始pH值为4.5。提高微量元素浓度或添加藜芦醇都可使C.versicolor的产酶能力增加，添加Tween80会有一定的促进作用。采用C.versicolor菌丝球进行重复分批产酶试验，结果表明菌丝球的稳定性很好，同一批菌丝球可连续利用10次，平均每批酶活力可保持在0.56 IU/mL，产酶能力优于聚氨酯泡沫固定化菌丝。将粗酶液和少量ABTS用于造纸废水深度脱色试验，在酶活力为0.5 IU/mL，色度浓度186倍条件下，经过24 h反应，CODCr去除率和脱色率达到80％。 通过凝胶渗透色谱法测定发现了造纸厂二沉池出水中木素（经纯化）的分子量为3.12万，经纯漆酶液处理1小时后的木素的分子量为4.66万，经纯漆酶液处理2小时后的木素分子量为5.86万。实验结果表明：经过漆酶处理后，废水中木素的分子量明显变大，漆酶在反应中对木素起到了聚合作用，白腐菌Coriolus versicolor漆酶液在一定的条件下可以将造纸厂二沉池出水中的木素及其衍生物催化聚合从而使其沉淀去除，废水中的木素及其衍生物减少，从而使废水的色度和CODCr降低，进而为造纸废水中水回用提供可能。  正文内容 漆酶（Laccase，EC）是白腐菌降解木质素酶系中的重要酶之一，具有高氧化还原电位、不需要H2O2启动而以O2为电子受体，因而具有比其他几种木质素氧化酶更实际的应用价值。 论文首先从液体培养体系出发，探索不同培养条件对白腐菌分泌漆酶的影响。液体培养体系下，白腐菌产漆酶的最佳条件是缓冲体系起始pH6.0、摇瓶转速为180 rpm、装液量为100 mL/500 mL。在所有测试碳源中，葡萄糖为最佳碳源，在二糖中以蔗糖为碳源，漆酶酶活相对较高，而多糖如淀粉不利于漆酶的生产。在所有测试氮源中，硝酸氨和酒石酸氨组合为最佳氮源，氯化铵和尿素的效果次之，蛋白胨的效果最差。当C/Namp;gt;10：1即高碳低氮培养条件下，有利于漆酶的形成。芳香化合物诱导剂ABTS浓度为0.5-1 mM时，对漆酶的生产影响最明显，与限氮培养基中产酶相比可提高酶