酵素與限制脢 [课件].pptVIP

酵素與限制脢 組員: 吳俊翰、沈稚鈞、吳旻霖、 陳敬為 綱要 酵素的構成 酵素的種類 酵素的專一性 酵素在生物技術上的應用 限制脢 酵素的構成 酵素主要由蛋白質所構成，不過許多酵素還需加上其它物質，即輔助因子；有些 RNA 也具有催化的能力，在分子演化上，可能是最早出現在地球上的巨分子。 酵素的種類 全脢 全脢是具有完整分子構造及催化能力的酵素。 一般酵素由蛋白質構成，但某些酵素為醣蛋白或脂蛋白，有些要加上輔助因子 (cofactor, coenzyme)，才成為功能完全的酵素 (全脢 holoenzyme)；若全脢失去了輔助因子，剩下的部份稱為 apoenzyme。 全脢的組成 ? Holoenzyme ? ＝? Apoenzyme ＋? Cofactor / Coenzyme? 輔助因子 輔助因子都是人體無法自行合成，須由外界攝取者，分成微量金屬及輔脢兩類。 微量金屬? 如 Zn2+, Mg2+, Mn2+, Fe2+, Cu2+, K+，以離子鍵結合在 His, Cys, Glu 等胺基酸；細胞多使用較輕的金屬，因為重金屬多有害處。 有機小分子 分子構造稍複雜而多樣，又稱為輔脢 (coenzyme)，哺乳類多由維生素代謝而來，無法自行合成；如 維生素 B 群、葉酸 (folic acid)、菸鹼酸 (niacin)。 酵素的組成 輔脢 一些非蛋白質的小分子會加入酵素構造中，以幫助催化反應進行。因為二十種胺基酸的官能基中，具有強荷電性者不到五個，而酵素活性區，經常需要較強的官能基來引發催化反應，部份酵素因此納入蛋白質以外的輔助因子參與其構造，作為催化的重要反應基團。 二十種胺基酸 輔脢的作用 改變酵素構形 加入酵素分子，誘使改變其立體構形，而使得酵素與基質的結合更有利於反應 協助催化反應 輔脢可作為另一基質來參與反應，但反應後輔脢構造不變。 通常輔脢作為某特定基團的轉移，可供給或接受基團 (如 -CH3, -CO2, -NH2) 或者電子，這類輔脢最是常見。 直接提供反應基團 提供一個強力的反應基團，吸引基質快速參加反應；有許多維生素都是輔脢，例如 維生素 B1 (thiamine)。 酵素的專一性酵素只與特定的基質結合，有很高的專一性，這是酵素重要特性之一。 專一性結合力量 立體專一性 專一性結合力量 有兩大類構成因素，一種是形狀的互補，另一種是吸引力量。 分子間的構形互補：有如『鎖頭與鑰匙 lock key』在形狀上的契合；但蛋白質分子較有彈性，與基質結合後可誘導生成更契合的構形。造成這種構形互補的主要力量是凡得瓦爾力，如圖 中 A 與 B 兩分子間的契合。 酵素與基質間會產生吸引力量。 構形互補 立體專一性 酵素分子如何辨認立體異構物？ 碳原子的原子軌道是根本原因。 酵素可辨認基質的立體不對稱性，只能對某一種立體異構物有催化反應, 而生成物也只有對應立體異構物之一。 如下頁左圖把基質分子中不對稱碳 (sp3) 四個鍵結中的一點 (A) 固定，再以酵素的專一性結合面接觸並確認 B-C-D 三點，就能分辨另一異構物的差異 (可能是 B-D-C) 而排斥之 (如下頁右圖，從 A 點向下看即可分出差異)。可見，碳原子的sp3軌道是立體關鍵。 酵素在生物技術上的應用 酵素免疫分析法 (ELISA) 2D 電泳 →→→ Mass 定序分析(快速分析表現蛋白質) Genome project 基因體計畫 酵素免疫分析法 (ELISA) 抗體可用來偵測其專一性抗原，而將抗體以酵素連接，可做為追蹤或定量的標幟；通常把免疫試劑之一的抗體固定在 固定相 (solid phase)，以利沖洗分離，稱為 ELISA(enzyme linked immunosorbent assay)。 2D 電泳 →→→ Mass 定序分析(快速分析表現蛋白質) 微量純化與分析技術，使得生化學家可以快速分離出一個蛋白質，並且準確判斷此蛋白質的身分。 通常從一個細胞樣本中，把總體蛋白質抽取出來，以二次元電泳分析之，定出所要找的目標蛋白質色點；切出此色點後，可直接在膠體中以專一性蛋白脢水解之，並以 HPLC 或毛細管電泳分離出單一胜汰片段，此一片段可用質譜儀或胺基酸定序儀分析其胺基酸序列，所得胺基酸序列由電腦資料庫中搜尋，即可判別原蛋白質的身分。 電泳 Genome project 基因體計畫