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破壁灵芝孢子粉中多糖的含最测定 36中国民族医药杂志2006年4月第2期 破壁灵芝孢子粉中多糖的含最测定 内蒙古呼和浩特铁路中心医院(O1o01O)白在贤 内蒙古药品检验所(010020)周雷梅韩塔娜张璐 摘要:目的:测定破壁灵芝孢子粉中多糖的含量.方法:采用比色法测定结果:比色法溺4定的线性范围为20.32ul/m1121. 92ul,IIIl,相关系数r=O.9982.平均回收率为10036%,RSD为2.18%(n=5),重现性(RSD=2.7s%)校好.结论:该方法准确, 可靠,重现性较好,适用于破壁灵芝孢子粉中多糖的含量测定. 关键词:破壁灵芝孢于粉;比色法;含量测定 中国分类号:R29文献标识码:B文章编号:1006—6810(2006)02—0036—02 灵芝,担子纲多孔菌科灵芝属真菌,被我国历代民族医 药学家誉为扶正固本的瑞草.经研究发现,它在提高机体 免疫力,提高机体耐缺氧能力,加强血液循环,提高血液供氧 能力,抑制肿瘤,保肝,解毒等方面有显着疗效.而灵芝的生 殖细胞孢子在这些方面的作用尤为突出,它荟萃了灵芝的精 华,各种有效成分和含量均较高,具有较高的药用价值.然 而,灵芝孢子的壁较硬,由几丁质构成,人体又没有溶解这种 物质的酶,所以只有破壁才能充分显示其高药用价值. 目前,有关破壁灵芝孢子粉的含景测定尚未见报道,又 经研究发现多糖为其药用疗效基础,故本实验采用硫酸蒽酮 显色比色法,同时考察了方法的专属性,准确性,精密性及线 性关系.结果表明本法准确,可靠,重现性较好,可用于破壁 灵芝孢子粉中多糖的含揖测定. 1仪器,试剂试药与样品来源 仪器:普析通用TU一190l型双光束紫外可见分光光度 仪.试剂与试药:无水葡萄糖对照品由中国药品生物制品检 定所提供(批号:110833—200302);其它试药均为分析纯. 2方法学考察 2.1含鼍测定方法的选择:灵芝孢子粉主要含多糖,蛋白 质,氮基酸,三萜,甾醇,维生索等化合物其中多糖类与硫 酸蒽酮发生显色反应,据此特点,选择葡萄糖作为对照品,采 用比色法进行含跫测定. 2.2测定波长的选择:分别取葡萄糖对照品溶液,灵芝破璧 孢子粉药材溶液经显色后在200—700nm波长范围进行光谱 扫描,结果上述两种溶液在波长625nm附近均有明显吸收, 故选择625nm波长为测定波长. 2.3供试品溶液的制备及含量测定的方法 2.3.1供试品溶液的制备:参照文献,取供试品粉末2, 精密称定,置索氏提取器中,加水9onll,电加热器加热回流提 取5小时,提取液转移至100m/量瓶中,加水至刻度,摇匀, 精密吸取50nd浓缩至约10nd,加入乙醇150ml,摇匀,4~C放 置12小时,取出,离心,倾出上清液,沉淀加水溶解并转移至 250nd量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,即得. 2,3.2含量测定的方法:参照文献),精密揖取供试品溶液 ZInl,置10ml具塞试管中,精密加入硫酸蒽酮溶液6ml,摇匀, 水浴中加热15分钟,取出,放人冰浴中冷却15分钟,照比 法(《中国药典~gt;2ooo年版一部附录vB),在625nm波长处 {受4定吸收度. 2,3.2.1加热时间的考察:参照文献方法n】,在固定冷却时 问的基础上察取同一份供试品,对显色加热时间进行考察, 并按含督测定方法进行检查,结果,显色加热时间为15分 钟,供试品吸收值最高,放将显色加热时间定为15分钟. 2.3.2.2冷却时间的考察:取同一份供试品,在显色加热时 问定为15分钟的条件下,于1O分钟,15分钟,2o分钟不同冷 却时间进行考察,并按含萤测定方法进行检测,结果冷却10 分钟时测得结果不稳定,冷却20分钟时测得吸收值较小,冷 却15分钟测得结果稳定且吸收值较大,故将冷却时间定为 i5分钟. 2.4线性关系考察:对照晶溶液的制备:精密称取lo5干 燥至恒重的葡萄糖对照品适量,加水制成每lml含0.Img的 溶液.分别精密吸取对照品溶液0.2rid,04ml,0.6ml,0.8ml, 1.0ml,1.2ml置10ml具塞试管中,加水至2.0nd,精密加入硫 酸蒽酮溶液6ml,摇匀,置水浴中加热15分钟,取出,放入冰 浴中冷却15分钟,以相应的试剂为空白,照比色法(《中国药 典}2ooo年版一部附录VB),在625~wn波长处测定吸收度, 以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线.结果浓 度2o.32}ml一-l21.92范围内呈良好的线性关系,觅裹 1回归方程Y=0.o0348X+0.104.r=0.9982 表l标准曲线数值表 2.5稳定性试验:取同一份供试品溶液,按含量测定法操 作,分别于0min,5nfin,10rain,15rain,20rain测定,结果,多糖类 化合物色后3o分钟内吸收值基本稳定不变. 2.