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第二章 生物制药工艺技术基础3精选
小规模培养可选择大小适当的三角瓶(50~2000ml),里面有选定的培养基,把筛选好的细胞株接入以后,旋转培养(50~l50r/min),4周后可进行继代培养。若采用固体培养,在培养基中加入0.7%~0.9%琼脂。 大规模培养方式主要是液体悬浮培养法,培养容器用桨式搅拌罐、空气气升式反应器。 * 为了保证细胞系的生产稳定,已研究了多种适宜的培养方式,简介如下: (1)二步法 从许多植物细胞培养与次生产物的形成来看,生物合成作用往往在细胞生长的后期,据此提出二步培养法。第一步培养基称为生长培养基,主要适合于细胞的生长;第二步称为合成培养基,用于次生产物的合成。 两种培养基往往有所区别,后者通常具有较低含量的硝酸盐或磷酸盐,或两者含量均较低。此外,通常也含有较低的糖分或少量可利用的碳源。 * (2)固定化培养 将悬浮培养的植物细胞包埋于固体基质中,成为一个固定的生物反应系统。包埋的基质可为多糖和多聚化合物,如褐藻酸盐、琼脂(糖)、聚丙烯酰胺、角叉菜胶。 由于这些支持物胶体本身的交联方式,使之对养料、水分及气体有一定的通透性,在不同程度上维持细胞的生物活力,从而保证进行生化反应的酶系和辅助因子的存在。 基于此原理,在细胞产生次生产物的时期,就将其固定化,加以营养介质及底物进行反应,将其制成颗粒状,注入柱式反应器,就可以进行连续循环反应。通过固定化细胞进行连续培养是实现商业化生产的有效途径。 * (3)代谢产物胞外释放 由于大部分有用的次生代谢物并不释放到培养基中,而是储存于液泡中,传统的提取药用次生代谢物的方法始于破碎细胞,使细胞只能一次性的使用。解决储存液泡中的次生代谢物使之释放到胞外,也是通过固定化细胞进行连续培养要解决的一个主要问题。 已发展出了化学试剂法、改变离子强度法、pH扰动法、电击法等。 (4)两相培养技术 即在培养基中引入第二相,细胞产物在原培养系统合成后,向第二相富集,从而减少了产物的反馈抑制,不仅提高了产量,而且简化了后处理。 * (四)植物细胞大规模培养的生物反应器特点 反应器的选择取决于生产细胞的密度、通气量以及营养成分的分散程度。常用的反应器 3种类型。 1、摇瓶 气体和营养成分的均匀分布通过振荡而实现搅拌目的。 2、搅拌型生物反应器 通过不同类型搅拌器的灵活应用有利于植物培养的高度混合,反应器内的温度、溶氧以及营养物浓度易控制,实验结果显示浆型搅拌器适用于植物细胞培养。 * 3 鼓泡塔生物反应器与气升式生物反应器 这类反应器通过外部循环泵或压缩空气作为动力,使反应器内的培养物上下混合。 ?(1)鼓泡塔生物反应器 鼓泡塔生物反应器是通过反应器底部的喷嘴及多孔板而实气体分散。 鼓泡塔生物反应器主要优点是:没有运动部件,操作不易染菌,在无机械能输入情况下,提供了较高的热量和质量传递;适用于对剪切敏感性细胞的培养,放大相对容易。缺点是混合不匀,缺乏有关反应器内的非牛顿流体的流动与传递特性的数据等。 ? * (2)气升式生物反应器 气升式生物反应器有内循环式和外循环式两种类型。其培养物流动性比鼓泡塔更为均匀。气升式生物反应器是植物细胞培养最合适的反应器之一,可以在低剪切下达到较好的混合和较高的氧传递效果。而且不易污染,操作费用也较低。 4、转鼓式生物反应器 转鼓式生物反应器是通过转动促进反应器内的氧及营养物的混合,设置挡板有助于提高氧的传递,在高密度培养时有高的传氧能力,在高密度培养时,转鼓式优于搅拌式。其缺点是难于大规模放大。 * 四、酶工程制药技术基础 (一)酶工程技术 酶工程 是酶学与工程学互相渗透结合,发展形成的生物技术,它研究酶和应用酶的特异催化功能,并通过工程化过程将相应原料转化成所需产物的技术。 除了第一代酶-酶制剂和第二代酶一固定化酶的广泛应用外,第三代酶,即包括辅助因子再生系统在内的多酶反应器也已取得迅速发展。 酶工程的主要内容包括酶的生产、分离、纯化、酶的固定化、酶与固定化酶的反应器以及酶与固定化酶的应用等。 * 随着生物技术与生物制造业的深入发展,当前酶工程技术的主要研究方向是: ① 酶的分离、纯化和工业化生产以及新酶的发现与应用; ② 酶和细胞的固定化技术与酶反应器(包括酶传感器)的研究; ③ 基因工程与蛋白质工程技术在酶的分子设计与酶生产中的应用; ④ 有机相中酶促反应的研究与应用; ⑤ 酶的抑制剂,激活剂的开发与应用研究; * ⑥ 抗体酶与核酶的研究与应用; ⑦ 模拟酶、合成酶
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