最新产硫酸软骨素酶菌株的筛选、发酵、酶的分离纯化及性质的研究.pdfVIP

产H醢软骨素酶菌株的筛琏，筮酵酶的分离纯化及性质的研究 产硫酸软骨素酶菌株的筛选、发酵、酶的分离纯化 及性质的研究 摘要 硫酸软骨素酶在研究硫酸软骨索类糖胺多糖的结构、性质与功能等方面有多 种重要用途。近年来，浚酶在晦床领域的应用广泛，用来治疗某些疾病如大肯节 病、椎间盘突出等。同时，该酶在制备低分子量硫酸软骨素方面也存在着广阔的 应用前景。因此，获得酶活力高的硫酸软骨素酶具有重要的挫沦和现实意义。本 研究从微生物中筛选出一株高产硫酸软骨素酶的菌株．并对菌株的发酵培养条 件、酶的分离纯化及酶学性质等做了系统的研究。 通过初筛和复筛从采集的样品中获得了一株高产硫酸软骨紊酶菌株，编号为 28．对其形态和生理生化特性进行了测定，初步鉴定该菌株为少动鞘氢醇单胞菌 (曲hingomonaspaucimobilis)。该菌株所产的硫酸软骨素酶为胞外酶。 为了提高产酶菌株的产酶能力，采用单次单因素实验方法对其进行了发酵产 0+硫酸软目 酶条件的优化。得到的最适发酵培养基组成为(％，w／v)：酵母粉1 0 O 5：最适发酵培养条件 素0．5+NaCl5+KH2P04 7H2 0,03+MgS040．5，起始pH8 为：摇瓶培养1 酶括力可达】2U／mL。 Fast 硫酸软骨素酶的分离纯化，采用了(N儿)2s04沉淀、DEAE—Sepharose G．100凝胶过滤层析等纯化步骤，结果获得了 Flow阴离子交换层析及Sephadex 87％，比活力为 62，酶收率为46 电泳纯的硫酸软骨素酶，酶纯化倍数为155 98 3kDa。 04U／mg。经SDS电泳呈单条带．分子量约为82 酶学性质的研究包括pH、温度、金属离子、底物浓度和底物专一|生等。结 果显示：该酶为诱导酶，在不添加硫酸软骨素的培养基中没有酶活性；该酶的最 5，最适反应温度为400；在实验所涉及的金属离子中，大部 适反应pH值为6 分金属离子对酶反应无影响：该酶对底物具有相对专一性，能降解硫酸软骨索、 透明质酸和肝素等这一类结构相似的硫酸软骨素类糖胺聚糖，而对甲壳素和壳聚 糖无降解作用。 对该硫酸软骨素酶的酶解产物进行了质谱分析．结果显示该酶的降解产物几 F硫酸软骨紊酶蒂株的筛选、发B酶的讣离纯化性质的研究 乎全为二一糖，}b度较-留，测得的降解产物的分子垦约为458Da。 关键词：硫酸软骨素酶；发酵条件优化，分离纯化：酶学性质 P醢酸软骨亲酶*#的镕《、发H鸸∞分离％化性质∞研究 onthe Study Screening，FermentationofChSase·PIoducing and oftheChSase Purification Strains，and Properties Abstract Chondroitinasehasa of in as varietyapplicationsmanyways，such the andfunctionsand studyingglycosanlmOglyc