栝楼桂枝汤对谷氨酸所致的pc12细胞损伤的保护作用研究.pdfVIP

5小结…．．j………………………………．．．．……………………………………………………………………．．19 1实验材料……………………………………………………………………………．．20 1．1主要试剂………………………………………………………………………………………………．20 1．2主要仪器………………………………………………………………………………………………．．21 1．3主要试剂配制……………………………………………………………………21 2实验方法………………………………………………………………………………21 2．1实验分组及处理………………………………………………………………………………．．21 2．2BCA法测定蛋白含量………………………………………………………………………………22 2．3Caspase．3活性的检测………………………………………………………………………………．22 2．4Western 2．5real time．PCR法检测GLGZD对Bax、Bcl．2mRNA表达的影响………………………．24 2．6统计分析………………………………………………………………………………………………．26 3实验结果……………………………………………………………………………．．26 3．1 3．2Western Blot检测Bcl．2、Bax蛋白表达情况………………………………………………．．27 3．3real．timePCR检测Bcl．2、BaxmRNA的表达情况………………………………………．．28 4讨论………………………………………………………………………………………………………………29 1 5小结………………………………………………………………………………………………………………3 结论…………………………………………………………………………………………32 参考文献…………………………………………………………………．．33 中英文缩略词………………………………………………………………36 致谢…………………………………………………………………………………………37 文献综述…………………………………………………………………．．38 作者简历…………………………………………………………………．．43 III 万方数据 中文摘要 目的： 观察栝楼桂枝汤(GLGZD)对谷氨酸(Glutamicacid，Glu)诱导的大鼠肾上腺嗜 铬瘤细胞(PCI2)损伤的保护作用的影响，并初步探讨其作用机制，从而为其治疗脑 卒中提供理论依据。 方法： 细胞进行试验。设立空白对照组和Glu损伤组(5、10、15、20、25retool／L)，处理 24 h，四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖活性，确定最佳浓度。设立空白对 照组和最佳Glu浓度组分别培养不同时间(1、2、4、6、8、10h)，MTT检测细胞活 性，最终确定Glu处理最佳的浓度和时间。光学显微镜观察造模条件下细胞形态和甲瓒 的迁移情况。 2 24、48 育PCI2 h对细胞活性的影响，确定GLGZD的培养时间；实验分为以下几组： mmol／L 培养基，GLGZD高、中、低剂量组培养24h后，加入终浓度为15 Glu继续孵 育6h。MTT法检测PCI2细胞生长和增殖活性；光学显微镜观察各组细胞形态；试剂 盒测定LDH含量、SOD活性、MDA含量；AnnexinV／PI双染色流式细胞术(FCM) 分析细胞凋亡情况。 3 性；采用Western Blot检测各组细胞Bcl．2和Bax蛋白表达情况；采用real．time