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体外三维细胞培养术在组织工程中的运用 杨清松 生命科学与生物制药学院 0909501162 生物制药09 摘 要：本文主要介绍了体外三维细胞培养术的三大基础原件——细胞、支持材料、培养基，及目前该技术在皮肤组织工程、血管组织工程、骨组织工程中的主要运用。 关键词：三维细胞培养术；组织工程；应用 Application of Three-Dimensional Cell Culture in Tissue Engineering Abstract: This paper mainly introduced three basic elements of Three-Dimensional Cell Culture棗cells, nsupport materials, culture medium. Also the application of Three-Dimensional Cell Culture in Bone Tissue Engineering, Skin Tissue Engineering and Vessel Tissue Engineering are introduced detailedly. Keywords: Three-Dimensional Cell Culture ；Tissue Engineering；Application 1 引言 组织工程学是20 世纪80 年代末期发展起来的一门新兴边缘学科[1]。组织工程是应用细胞生物学、生物材料和工程学的原理，研究开发用于修复或改善人体病损组织或器官的结构、功能的生物活性替代物的一门科学。, 三维细胞培养技术( three-dimensional cell culture, TDCC) 是指将具有三维结构不同材料的载体与各种不同种类的细胞在体外共同培养, 使细胞能够在载体的三维立体空间结构中迁移、生长, 构成三维的细胞2载体复合物。 2 基础介绍 2.1 细胞 细胞是体外构建工程组织、器官最为重要的材料。从组织工程学的应用角度出发考虑,用于体外构建工程组织、器官的细胞需满足以下三个基本前提: (1) 具有特定的分化表型或定向分化潜能[3]; (2)可靠的细胞来源; (3) 不引发移植排斥反应。目前用于体外构建工程组织、器官的细胞按其来源分为自体细胞、同种异体细胞和异种细胞三类。这三类细胞均不能同时满足上述的三个基本要求。其中自体细胞存在来源严重短缺的限制;异种细胞存在移植排斥反应、传染动物源性病毒和伦理的制约;同种异体细胞同时存在着来源受限和移植排斥反应的问题。 2.2 支持材料 生物材料在组织工程中起着替代细胞外基质或组织、器官的基质的作用。其主要功能包括以下两点:其一,为体外构建工程组织或器官提供三维的细胞生长支架,使细胞间形成适宜的空间分布和细胞联系;其二,提供特殊的生长和分化信号,诱导细胞的定向分化和维持细胞分化[4 ] 。随着对材料- 生物体相互作用机理研究的深入,对生物材料的要求,已从包括机械强度、亲水性、可降解性和易加工程度等理化性能和生物相容性的基本要求,发展到对生物材料的形状结构进行精密的设计和加工及对生物材料表面的改造和修饰,赋予生物材料特定的生物活性和功能。 三维骨架由基质材料构建,主要作用是提供物理强度和张力,理想的基质材料应具备以下特点: (1) 良好的组织兼容性及生物可降解性; (2) 良好的细胞界面,利于细胞黏附、增殖及分泌细胞外基质; (3) 具有三维空间结构,有利于营养物质和代谢产物的交换; (4) 具有一定的强度和可塑性。三维骨架结构除了提供足够的机械强度外,还必须为种子细胞提供三维空间结构. 生物材料的三维结构可在三个尺度水平上控制工程组织、器官的生长发育过程: (1) 在cm - mm级水平决定工程组织的形状和大小; (2) 在μm 级水平通过生物材料的空隙大小和形态结构调节细胞的迁移和生长; (3) 在nm 级水平通过生物材料的表面化学性质调节与其接触的细胞的粘附和基因表达。 2.3 培养基 培养基是细胞三维培养中对细胞分化起着关键性作用, 但尚未引起足够重视的环境因素[5 ] 。迄今为止, 商品化的细胞培养基是为支持细胞的体外增殖而设计的。由于细胞在体外增殖的同时往往伴随着不同程度的去分化而失去某些分化表型,以体外构建组织、器官为目的的细胞三维培养一般需经历细胞增殖、细胞分化和组织或器官型形成三个阶段。细胞体外培养常规使用的细胞培养基、生长因子或胎牛血清完全适用于细胞三维培养的细胞增殖阶段。在细胞分化阶段应尽可能减少生长因子和或胎牛血清的用量, 减少培养环境的促细胞有丝分裂压力。商品化的细胞培养基的电解质成分与动物或人血清的电解质成分不相同,培养基中Na + 浓度较高而K+ 浓度较低。提高培