海洋生物学实验操作手册.pdfVIP

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2018-05-04 发布于河南
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海洋生物学实验操作手册

教育部顧問室海洋教育先導型計畫課程名稱：海洋生物學海洋生物學實驗操作手冊國立高雄大學生命科學系分辨三種絨毛蟹方法： 1.是否螯腳掌部內外表面均具絨毛，且額緣高低起伏，具明顯額齒…………. 若是則進行步驟2 是否螯腳掌部內外表面不同時具絨毛，且額緣平直，不具明顯額齒………. 若是則進行步驟3 2. (1)若額緣上之額齒圓鈍而成波浪狀，第四前側齒退化，則為日本絨螯蟹 (2)若額緣上之內額齒尖銳且其間的缺刻最深，第四前側齒明顯，則為中華絨螯蟹 3. (1)若螯腳掌部僅內表面具絨毛，第三顎腳狹窄，則為狹顎絨螯蟹 (2)若螯腳掌部僅外表面具絨毛，第三顎腳正常，則為台灣絨螯蟹生物資訊相關主題生物資訊相關主題生物資訊資料庫(bioinformatics database) 序列分析(sequence analysis) 找尋基因(gene finding) RNA二級結構預測(RNA secondary structures prediction) 比較基因體學(comparative genomics) 蛋白質結構的預測 (protein structure prediction) 基因體 DNA的抽取 1. 取 30mg的組織塊，將其剪碎 2. 取 200μl LYS buffer 至 1.5ml eppendorf 3. 將剪碎的組織加到含有 LYS buffer的 eppendorf內 4. 把組織磨碎 5. 加 20μl Proteinase K 6. Vortex 20秒，混合均勻 7. 於 60℃作用 1 小時 8. 於 70℃作用 20 分鐘 9. 以70℃預熱 d.d. H O 2 10.加 200μl EX buffer 到組織液並 vortex混合均勻 11. 於 70℃作用 10 分鐘 12.加 210μl isopropanol, vortex混合均勻 13. 將 Mini Column置於 Collection tube 上 14. 將混合液吸至 Mini Column 15. 離心 8000 rpm ，2 分鐘 16. 去下清液 17.加 0.5ml WS buffer 至 Mini Column 18. 離心 8000 rpm ，2 分鐘 19. 去下清液 20.重複 17 、18 、19 步驟一次 21. 離心 12000 rpm ，2 分鐘 22. 將 column移至新的 1.5ml eppendorf 23. 加入 200μl預熱的 d.d H O .到 column內 2 24.靜置 1~5 分鐘 25. 離心 12000 rpm ，1 分鐘 26. 將萃取出來的 DNA保存在 -20℃ RE digest 1.取 RE 10×buffer 2μl 至 eppendorf 2.加 100×BSA 0.2μl 3.加 1μg DNA 4.加 d.d. H