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第十二章 生物技术与植物育种 一、教学内容 生物技术与植物育种 二、教学目标 使学生熟悉生物技术育种有哪些方法。细胞融合的过程，转基因技术的操作方法，分子标记在育种中的应用。 三、教学重点：各种生物技术在育种中的应用。 四、教学难点：转基因植物的遗传特点。 第一节 细胞和组织培养在植物育种中的应用 一: 基本概念 植物体细胞在离体条件下，以及在离体培养之前，会发生各种遗传和不遗传的变异。 无性系变异（somaclonal variation）：将遗传上的变异称为无性系变异； 变异体（variant）：不加任何选择压力而筛选出的变异个体； 突变体（mutant）：经过施加某种选择压力所筛选出的无性系变异。 二: 体细胞变异的遗传基础 （一）细胞遗传学基础 1.外植体细胞先存在的变异 2.染色体数量变异 3.染色体结构变异，断裂和重组，相互易位，缺失等。 （二）细胞分裂机制与遗传变异 1.细胞脱分化后的细胞异常分裂 2.无丝分裂 （三）分子遗传学基础 1.基因突变 2.DNA碱基修饰 3.基因重排 4.DNA总量的变化 5.转座因子的激活 三: 体细胞无性系变异的广泛性和多样性 四: 体细胞无性系变异的分子检测 （一）酶谱分析检测变异 （二）RFLP检测变异 （三）RAPD检测变异 （四）其他分子检测 五. 组织培养获得变异体或突变体的方法 （1）.组织培养之前的变异及其选择：有些变异发生在植株的某一部分的细胞中，需要将这部分变异的细胞从植株上分离下来进行培养，使之再生为植株。 利用体细胞变异育成非洲菊新品种。体细胞的遗传突变在自然条件下时有发生，本研究以组织培养手段，将发生变异的体细胞再生成植株和繁殖同一的无性系，新的植株和无性系将表达与遗传基础突变相应的性状变异，经过系间比较观察选出优系选择嵌合体为实验对象，在实验方法上加速了变异的发现和分离过程。在红花品种中选黄花变异系，及在白花品种中选粉红花变异系，均获成功，加速了选育周期。 （2）组织培养期间的变异及其选择：组培过程中对培养物施加某种处理，使之发生变异后进行选择。 Gengenbach,B.G.（1975）用玉米小斑病的T小种毒素在感病的玉米培养物中进行筛选，经过愈伤组织培养以及毒素的继代培养，最后获得了抗性愈伤组织并诱导出再生植株。 （3）组织培养后的选择和鉴定：这种选择方式中所用的培养基一般不包含特定的选择因素，但往往包含诱变剂，由此产生的变异植株可能出现某种有益的变异，将再生植株种在田间或温室内进行选择。这种选择多局限于形态性状，如株型、叶色以及其他可见的性状。 六.体细胞无性系变异的筛选 1.正选择法，也称直接选择法，其原理是把大量的细胞置于有选择剂的培养基上，使正常细胞不能生长，而各种抗选择条件的突变细胞能够生长，从而达到直接选择的目的。 2.负选择法。对许多致死突变体不能采用直接选择法，可采用某一非允许条件的培养基，使突变的细胞不能正常生长，而野生型能生长，然后加入负选择剂。 3.突变体的鉴定 七：细胞与组织培养的其他利用途径 （一）离体胚的培养的应用 1.使远缘杂种的胚发育成植株：1925年Laibach首先在亚麻属的中间杂种中采用了这一方法，1991年李浚明等用普通小麦品种农大146作木本，簇毛麦作父本，经有形杂交和杂种未成熟胚培养，成功地获得了杂种植株； 2.促进核果类植物胚的后熟作用：早熟品种与晚熟品种杂交，很难得到杂交后代，用幼胚离体培养就能得到杂交后代，因此在核果类早熟性育种中常采用这种方法；3.打破种子的休眠期；用离体胚培养法，几天就可长成幼苗，大大缩短了育种年限。 （二）快速繁殖 通过分生组织的培养，可以快速繁殖有经济价值的植物，如花卉、药材等，有些植物应用次法，一年可以产生106~107个植株。如广西用此法繁殖甘蔗苗比常规法效率高1000倍以上。由此法产生的植株一般都整齐一致，尤其是对特别宝贵的基因型，用此法扩繁更有意义。方法有愈伤组织培养和丛芽培养等。 （三）种质保存 有些植物种质的保存已经正式采用组培方法，荷兰的所有甜菜种质都是用此法保存的，当然这并不意味着不再应用种子。 （四）产生无病毒植物材料 通过茎尖培养可以淘汰病毒，还可能淘汰某些细菌，这对于营养繁殖的植物是非常重要的。目前国内很多植物都是通过这种手段脱毒，由此而得到的后代可以大大提高产量。 （五）花药培养 通过花药培养进行单倍体育种。 （六）胚珠或子房培养及试管受精 克服远缘杂交不亲和性的有效方法，1967年Zenkteler采用试管受精法，克服了石竹科内远缘杂交的不亲和性。他在异株女蒌菜和红色女蒌菜的中间杂交中和异株女蒌菜的属间杂交中，采用离体培养子房、人工授精的方式，使