低聚甘露糖醛酸升高白细胞作用及机理研究-药物化学专业论文.pdf.docx

以环磷酰胺所致小鼠骨髓抑制模型为药效筛选平台，以白细胞和骨髓有核细胞数为观察指标，进一步研究了M5800的升白作用。结果表明，M5800在180mg/kg至540mg/kg范围内，均可明显升高小鼠白细胞数量和骨髓有核细胞数量，与模型组比较有明显差异。3.在细胞水平上研究了M5800 升高白细胞的作用机理：（1）利用造血祖细胞体外琼脂培养法，通过体内给药和体外给药二种不同的给药途径，观察M5800对正常小鼠和模型小鼠粒-巨噬系造血祖细胞集落（CFU-GM）增殖分化的影响；采用造血因子生物活性检测法，研究经M5800诱导制备的骨髓基质细胞、脾细胞和胸腺细胞的培养上清液对小鼠CFU-GM增殖分化的影响。结果表明，①M5800能明显促进正常小鼠CFU-GM集落的形成，与空白组比较，有显著性差异。并且在3.125μg/mL到25μg/mL范围内，随着药物浓度的加大，作用也逐渐增强，在25μg/mL时作用达到最大。②M5800体内给药，180mg/kg、360mg/kg和540mg/kg三个剂量组均能明显促进环磷酰胺模型小鼠CFU-GM的数量，与模型组比较，有极显著性差异。③ 经M5800诱导的骨髓基质细胞培养上清液，可明显促进CFU-GM的形成，在6.25μg/mL到50μg/mL 范围内，与对照组比较，有明显差异。经M5800诱导的脾细胞和胸腺细胞培养上清液，也能明显促进CFU-GM的形成，与对照组比较，有明显差异。表明经M5800 诱导的细胞培养上清液中粒-巨噬系集落刺激因子（GM-CSF）的含量或活性增加。（2）利用MTT法，检测了M5800对正常小鼠和环磷酰胺抑制模型小鼠骨髓基质细胞增殖能力的影响。结果显示，① M5800在6.25μg/mL到50μg/mL浓度范围内，能明显促进正常小鼠骨髓基质细胞的增殖，并且在25μg/mL时作用达到最强。② M5800对环磷酰胺抑制小鼠骨髓基质细胞的增殖有一定促进作用，其中50μg/mL组，与空白组比较，有显著性差异。（3）利用ELISA法研究M5800 对骨髓基质细胞分泌GM-CSF和干细胞因子（SCF）的影响，利用MTT法研究M5800对脾淋巴细胞分泌白介素-3（IL-3）的影响。结果表明，① M5800在12.5μg/mL至50μg/mL浓度范围内，能明显促进骨髓基质细胞分泌GM-CSF，与空白组比较有明显差异。② M5800在6.25μg/mL 和50μg/mL范围内，能明显促进骨髓基质细胞分泌SCF，与空白组比较有显著性差异。③ M5800能明显提高脾淋巴细胞产生IL-3的能力，与空白组比较，有显著性差异。（4）将M5800与异硫氰酸荧光素（FITC）进行反应，对其还原性末端进行荧光标记。培养骨髓基质细胞，将荧光标记物与骨髓基质细胞共同孵育，利用激光共聚焦扫描显微镜观察荧光标记药物在细胞中的定位情况。结果表明，M5800 可作用于骨髓基质细胞，并在胞浆中发挥作用。关键词：低聚甘露糖醛酸、白细胞减少症、骨髓有核细胞数、骨髓基质细胞、粒-巨噬系造血祖细胞集落、粒-巨噬系集落刺激因子、干细胞因子、白介素-3、荧光标记Effects of Oligomannuronaic acidinPromotingLeucocyte Growth andits Mechanism AbstractLeukopeinais acommoncomplicationintheprocess ofradiotherapyand chemotherapyoftumor,itrefers thattheperipheralwhitebloodcellnumbersbelow4 3109/L.Themainclinicalsymptomsisweakness,dizziness,limbweaknessandcold.Ifnottreatmentintime,severeinfectionandcomplicationsmaybeoccur. Therefore,regulatingthebodyresistancetodisease,especiallytheresistanceof neutropeniaaftercancertreatment,reducetheincidenceofinfection,is thekeyfactors toimprovethequalityofanticancertherapy.Atpresent,thedrugstotreatmentleucopeniaarevitamins,purinenucleotides, coenzymesandcolony-stimulatingfactor.Thesedrugs’effectsarenotideal,orthey areexpe