湖南省长沙市长郡卫星远程学校2013-2014学年高二下学期生物《选修一_专题二_课题1_微生物的实验室培养2+课题2_土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》课件.pptVIP

微生物的实验室培养 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 （二）统计菌落数目 统计菌落数目的理论依据： 　　当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。因此，恰当的稀释度是成功地统计菌落数目的关键。为了保证结果准确，通常将几个稀释度下的菌液都涂布在平板上，培养后再选择菌落数在30～300的平板进行计数。 每克样品中的菌株数 = (C÷V)×M C：某一稀释度下平板上生长的平均 菌落数 V：涂布平板时所用的稀释液的体积 (ml) M：稀释倍数 　　统计的菌落往往比活菌的实际数目低。这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。 注意： 　　 两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果。 　　1.第一位同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230。 　　2.第二位同学在该浓度下涂布了三个平板，统计的菌落数分别为21、212和256，该同学以这三个平板菌落数的平均值163作为统计结果。 实例1 　　你认为哪位同学的结果更接近真实值？这两位同学的实验需要改进吗？如果需要，如何改进？ ? 　　第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了3个平板，但是，其中1个平板的计数结果与另2个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。 ? 　　你认为哪位同学的结果更接近真实值？这两位同学的实验需要改进吗？如果需要，如何改进？ 因此，这两位同学的实验需要改进，在设计实验时，一定要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性。在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否一致，结果不一致，意味着操作有误，需要重新实验。 说明设置重复组的重要性。 　　 在做本课题的实验时，A同学从对应106倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌落。但是，其它同学在同样的稀释度下只选择出大约50个菌落。 　　其他同学认为A同学的结果有问题。他们分析可能是A同学的培养基被杂菌污染了，或者培养基中混入了其他含氮物质，因而导致不能分解尿素的细菌也能在该培养基上生长。 实例2 　　但是，A同学确信自己的实验操作准确无误，与其他同学的结果之所以不相同，是因为自己所选用的土壤样品不同。 　　但是，A同学确信自己的实验操作准确无误，与其他同学的结果之所以不相同，是因为自己所选用的土壤样品不同。但是，A同学在设计实验的时候并没有设置对照，因而此时也拿不出令同学们信服的证据。 　　你能通过设置对照，帮助A同学排除上述两个可能影响实验结果的因素吗？ 　　一是由于土样不同，二是由于培养基污染或操作失误。究竟是哪个原因，可以通过实验来证明。 　　一是由于土样不同，二是由于培养基污染或操作失误。究竟是哪个原因，可以通过实验来证明。 一种方案：可以由其他同学用与A同学一样的土样进行实验，如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。 另一种方案： 　　将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。 　　通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。 实验设计 土壤中分解尿素的细菌的分离与记数 土壤中某样品细菌的分离与计数 　从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。 实验步骤 1．土壤取样 　　制备5个牛肉膏蛋白胨培养基和15个选择培养基。　　 实验步骤 2.制备培养基 　　制备5个牛肉膏蛋白胨培养基和15个选择培养基。 　　注：每个稀释度下需要3个选择培养基，1个牛肉膏蛋白胨培养基。稀释倍数为103~107。　　 实验步骤 2.制备培养基 　　为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？ 　　 因为土壤中各类微生物的数量(单位：株/kg)是不同的，例如在干旱土壤中的上层样本中：好氧及兼性厌氧细菌数约为2 185万，放线菌数约为477万，霉菌数约为23.1万。因此，为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。 2014年上学期 湖南长郡卫星远程学校 制作 13 稀释涂布平板法 　　1.将分别盛有9mL水的6支试管灭菌，并按101~106的顺序编号