选1-5DNA和蛋白质技术.ppt

第1讲 人体的内环境与稳态 学海导航·高考总复习（第1轮） 生物 生物技术实践 第5讲　DNA和蛋白质技术 选修 1 高考有我，前程无忧 考点1　DNA的粗提取与鉴定 1．DNA提取原理： (1)不同条件对DNA和蛋白质作用对比： 试梳理 0.14 mol/L　 增大 不溶解 水解 增大 60～80℃ (2)洗涤剂：能瓦解　 　，对DNA　 　影响。 (3)DNA鉴定：　 　条件下，DNA遇　 　被染成　 　色。 2．实验过程： (1)材料选取：选取DNA含量相对　 　的生物材料，如　 　血细胞。 (2)破碎细胞，获取含DNA滤液：动物细胞可用　 　处理，使其　 　；植物细胞需用　 　瓦解细胞膜。 (3)去除滤液中的杂质：利用DNA在不同浓度的NaCl溶液中　 　的不同，通过控制NaCl溶液的浓度去除杂质。 (4)DNA析出与鉴定：将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积相等的、冷却的体积分数为　 　的　 　溶液。之后进行鉴定。 细胞膜 无 沸水浴 二苯胺 蓝 较高 鸡 蒸馏水 吸水涨破 洗涤剂 溶解度 95% 酒精 3．实验注意事项： (1)以血液为实验材料时，需在血液中加入　 　防止凝固。 (2)用洗涤剂处理植物细胞时动作要　 　，防止产生大量　 　。加入酒精后用玻璃杯搅拌动作要　 　，防止DNA分子　 　，不能形成絮状沉淀。 (3)鉴定DNA用的二苯胺试剂要　 　，否则影响实验效果。 考点2　多聚酶链式反应扩增DNA片段 1．多聚酶链式反应原理： (1)多聚酶链式反应，即　 　技术，是一种　　 迅速扩增DNA的技术。 (2)DNA热变性原理，即： 柠檬酸钠 轻缓 泡沫 轻缓 断裂 现配现用 PCR 体外 冷却 (3)引物：由于DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，只能从　　端把脱氧核苷酸连到已经合成的脱氧核苷酸链上，所以需要　 　合成的一段脱氧核苷酸链提供3′的末端，引导延伸过程。 2．PCR反应过程： (1)变性：当温度上升到　 　以上时，双链DNA解聚为单链。 (2)复性：温度下降到　 　左右时，两种　 　通过　 　与两条单链DNA结合。 (3)延伸：温度上升到　 　左右时，溶液中的四种脱氧核苷酸(A、T、C、G)在 　 　的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。 3．DNA含量测定： DNA在　 　的紫外线波段有一强烈的吸收峰，可根据这一特点使用　 　 进行测定。 3′ 人工 90 ℃ 50 ℃ 引物 碱基互补配对 72 ℃ DNA聚合酶 紫外线分光光度计 260 nm 考点3　血红蛋白的提取和分离 1．方法及原理： 2.实验过程： 生理盐水 血浆 蒸馏水 甲苯 3 磷酸缓冲液 凝胶色谱 使用SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳 1．判断下列有关DNA粗提取与鉴定的叙述的正误 (1)调节NaCl溶液浓度或加入木瓜蛋白酶，都可以去除部分杂质(2011·江苏卷T19－B) ( ) (2)将丝状物溶解在2 mol/L NaCl溶液中，加入二苯胺试剂即呈蓝色(2011·江苏卷T19－C)( ) (3)洗涤剂能瓦解细胞膜并增加DNA在NaCl溶液中的溶解度(2012·江苏卷T18－A) ( ) (4)鸡血细胞液中加入少许嫩肉粉有助于去除杂质(2015·江苏卷T25－D) ( ) 答案：（1）√（2）×（3）×（4）√ 查能力 2．判断下列有关多聚酶链式反应扩增DNA片段的叙述的正误 (5)用PCR方法扩增目的基因时不必知道基因的全部序列(2013·江苏卷T22－B) ( ) (6)PCR反应中温度的周期性改变是为了DNA聚合酶催化不同的反应 (2014·江苏卷T23－B) ( ) 3．判断下列有关血红蛋白的提取和分离叙述的正误 (7)在凝胶色谱法分离过程中，血红蛋白比分子量较少的杂蛋白移动慢 (2011·广东卷T5)