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基因工程材料分析原理：是一种按照人们的构思和设计，在体外将一种生物的个别基因插入质粒或其他载体分子，构成遗传物质的重组，然后导入到原先没有这类分子的受体细胞内进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产生人类所需要的基因产品的操作技术。 大鼠γ-干扰素（IFN-干扰素）基因转染大鼠肺泡巨噬细胞和气道上皮细胞的实验研究 大鼠γ-干扰素（IFN-干扰素）基因转染大鼠肺泡巨噬细胞和气道上皮细胞的实验研究 hIGF-1转基因促周围神经再生和抑制肌肉萎缩的实验研究 hIGF-1转基因促周围神经再生和抑制肌肉萎缩的实验研究 转化生长因子β基因转染兔骨髓间充质干细胞的实验研究 转化生长因子β基因转染兔骨髓间充质干细胞的实验研究 总结 在DNA分子水平上按照人们的意愿进行的定向治疗的生物的新技术，更加有针对性 表达水平稳定时程长，使治疗彻底性 基因治疗前景具有优越性 * 基因工程技术 基因治疗 大鼠γ-干扰素（IFN-干扰素）基因转染大鼠肺泡巨噬细胞和气道上皮细胞的实验研究 异同 总结 hIGF-1转基因促周围神经再生 和抑制肌肉萎缩的实验研究 转化生长因子β基因转染兔骨髓间充质 干细胞的实验研究 细胞因子是调节机体细胞免疫的重要物质。已有实验证实机体局部补充γ-干扰素可调节免疫低下宿主肺部细胞免疫功能 ，从而明显增强其抵抗感染的能力。 本实验研究肺部基因转染的方法补充细胞因子，以弥补局部补充γ-干扰素的不足。 真核表达重组载体（采用RT-PCR技术克隆大鼠γ-干扰素，并将其定向克隆到逆转录病毒载体pLXSN上 ） 重组载体转染培养的AM和气道上皮细胞 PCR法鉴定重组载体整合在细胞基因组DNA上 检测细胞培养上清γ-干扰素浓度和活性 结论：大鼠γ-干扰素重组表达载体可成功转染并整合DNA，并分泌有活性的γ-干扰素 3 周围神经损伤后修复与再生涉及多种因素，例如神经营养因子对神经元胞体的保护，神经再生微环境的重建等。因此周围神经损伤后再连接、设法保护神经元胞体减少退变死亡、预防骨骼肌萎缩和运动终板、感觉终器的退变是治疗的关键。 本实验通过质粒为载体的人胰岛素样生长因子-1（hIGF-1)注射到神经损伤局部，在损伤神经轴突摄取、转染并通过轴浆运输到脊髓和骨骼肌组织来来了解其促周围神经再生、抑制骨骼肌萎缩和保护运动神经元细胞的作用，通过不同时间观察hIGF-1基因在脊髓运动神经元和骨骼肌细胞中的表达、超显微结构、电生理学等观察了解作用时间及机制。 构建hIGF-1的真核细胞表达质粒（PCR方法从人的肝细胞cDNA文库中克隆出hIGF-1cDNA 定向插入真核细胞表达载体pcDNA3.1中 鉴定插入质粒的hIGF-1基因序列（酶切电泳和基因测序） 分组注射 检测hIGF-1基因表达 结论：本实验通过质粒为载体的人胰岛素样生长因子-1注射到坐骨神经损伤局部，结果显示，外源性hIGF-1能被损伤神经轴突摄取并通过轴浆运输到达脊髓和骨骼肌组织中，一周左右脊髓中表达达高峰，而在肌肉中2周左右表达最高；hIGF-1能促进周围神经再生、抑制骨骼肌萎缩和保护运动神经元：一次局部给药作用时间长且安全有效。本实验为该治疗提供了一个新思路。 3 转化生长因子β（TGF-β）是创伤愈合过程中重要的调控因子。其具有刺激Ⅰ型胶原合成与成熟的作用，从而促进创伤愈合，但过度表达会引起细胞外基质过渡沉积，导致病理性瘢痕和纤维化疾病。另一亚型（TGF-β）通过与TGF-β等竞争TGF-βⅡ受体，具有拮抗TGF-β作用，使愈合创面中Ⅲ型胶原比例增高，从而降低Ⅰ、Ⅲ型胶原比例，达到抗瘢痕的作用。因此，将人的TGF-β基因在创面愈合时转染入局部创伤组织，其表达的TGF-β可改变胶原的构成，达到预防病理性瘢痕形成的目的，提高愈合创面的质量。 本实验通过构建TGF-β重组腺病毒载体，转染兔骨髓间充质干细胞（MSCs），使其在细胞内得到表达，为创伤愈合的基因治疗提供研究基础。 TGF-β重组腺病毒载体构建（PCR扩增） MSCs的培养和鉴定 TGF-β重组腺病毒载体转染MSCs 结论：TGF-β重组腺病毒载体成功构建并在MSCs内表达 异同 相同 不同（1） 不同（2） 1.都运用PCR技术来获取重组质粒 2.都是基于基因治疗的目的 载体： 1.逆转录病毒载体pLXSN 2.cDNA 3.腺病毒 鉴定表达的方法： 1.PCR产物电泳 2.注射 3.脂质体法观察绿色荧光蛋白的表达 * * *