高中生物奥赛核酸的合成-DNA（共161张PPT）.ppt

在细胞中发现有一种O6甲基鸟嘌呤甲基转移酶，能直接将甲基从DNA链鸟嘌呤O6位上的甲基移到蛋白质的半胱氨酸残基上而修复损伤的DNA。这个酶的修复能力并不很强，但在低剂量烷化剂作用下能诱导出此酶的修复活性。 * 光复活酶在生物界分布很广，从低等单细胞生物一直到鸟类都有，而高等的哺乳类却没有。 * 4. 重组修复 在重组修复过程中，DNA链的损伤并未除去。 重组修复至少需要4种酶组分。重组基因recA编码一种分子量为40000的蛋白质，它具有交换DNA链的活力。RecA蛋白被认为在DNA重组和重组修复中均起关键作用。 * SOS反应 诱导修复是细胞DNA受到严重损伤或DNA复制系统受到抑制的紧急情况下，为求得生存而出现的一系列诱导性修复。正常的复制和修复系统无法完成DNA的复制，此时会启动应急反应。 SOS反应诱导的修复系统包括避免差错的修复（无差错修复）和倾向差错的修复。 sos修复是准确性差的修复方式。 。 * 避免差错的修复: SOS反应能诱导光复活切除修复和重组修复中某些关键酶和蛋白质的产生，从而加强光复活切除修复和重组修复的能力。 倾向差错的修复：SOS反应还能诱导产生缺乏校对功能的DNA聚合酶，它能在DNA损伤部位进行复制而避免了死亡，可是却带来了高的突变率. 避免差错的修复 倾向差错的修复 他们先使大肠杆菌在以N15的NH4Cl为唯一氮源的培养基中生长，使其DNA全部变成N15的DNA。然后将细菌转入含N14 的NH4Cl普通培养基，并将各代的细菌DNA抽提出来进行CsCL密度梯度离心。由于N15比N14DNA的密度大，离心时就形成位置不同的区带。他们发现在N15培养基上生长的细菌只形成一条N15的DNA区带，移至N14培养基上经过一代后，所以的ＤＮＡ的嘧啶在Ｎ１４和Ｎ１５之间，说明形成了半Ｎ１５和一半Ｎ１４的杂交分子，第三代以后Ｎ１４ＤＮＡ成比例的增加。 DNA的复制开始于染色体上固定的起始点。起始点是含有100-200个碱基对的一段DNA。显示ＤＮＡ的两条链在起始点形成叉子样的复制叉，随着复制叉的移动完成ＤＮＡ的复制过程。说明ＤＮＡ复制可以朝一个方向，也可以朝两个相反的方向进行。 在真核生物染色体的不同位置上有多个起始点，如。复制叉数目很大，复制总速度比原核生物快。果蝇胚胎ＤＮＡ３ｍｉｎ复制一代，而基因组总长只有果蝇１／４０的大肠杆菌染色体复制一代却需要４０ｍｉｎ。 1968年冈崎等用H3标记的dTTP掺入噬菌体去感染大肠杆菌，发现段时间内首先合成较短的DNA片段，接着出现较大的分子。 ＤＮＡ复制过程最基本的酶促反应是四种脱氧核苷酸的聚合反应。 1956年Kornberg等首次从大肠杆菌中分离出催化此反应的DNA聚合酶。他们将大肠杆菌提取液与P32标记的dNTP混合物一块温育，发现少量新合成的DNA的磷酸根上有p32标记，催化这个反应的酶是DNA聚合酶I，现已高度纯化。它是相对分子量为109KDa的一条肽链。 TaqDNA聚合酶是Mg2+依赖性酶，该酶的催化活性对Mg2+浓度非常敏感.以活性程度 很低的鲑鱼精子DNA为模板，dNTP的浓度为0.7～0.8mmol/L时，用不同浓度Mg2+进行 PCR反应10min，测定结果为Mgcl2浓度在2.0mmol/L时该酶催化活性最高，此浓度能最 大限度地激活TaqDNA聚合酶的活性 脱氧核苷酸逐个加到引物的３‘端，是按照Ｗａｔｅｒｓｏｎ和Ｃｒｉｃｋ的碱基配对的原则，当模板上出现一个A时，新链就加上一个脱氧的T。新的研究表明，DNA聚合酶不仅能催化DNA链的延长，还能从DNA的3’或者5‘末端按照3’-5‘或者5’-3‘的方向把DNA链逐步切断。 * 9 * 7 * 9 1969年发行一个大肠杆菌的变异株DNA聚合酶I活力很低，但是仍能以正常的速度合成DNA，因此怀疑存在其他的DNA聚合酶，70年代分离出了DNA聚合酶II和III。DNA聚合酶 Ⅲ活力是I的15倍，II的300倍。 * 9 450KDa，主要成分是分子量为140KDa的a链，b亚基的功能是识别引物并使DNA母链与引物链结合。一旦全酶结合在正确的起始位置上，DNA聚合酶III辅酶就以游离的形式释放，随后DNA聚合酶III复合物催化子代DNA链的延伸。 引物延伸温度温度的选择取决于Taq DNA聚合酶的最适温度。一般取70～75℃,在72℃时酶催化核苷酸的标准速率可达35～100个核苷酸/秒。每分钟可延伸1kb的长度。 真核生物的染色体DNA是线形双链分子，含有许多复制起点，因此是多复制子，每个复制子约有100-200Kbp。人体细胞平均每个染色体含有1000个复制子。 真核生物中至少有5种DNA聚合酶，分别命名为α 、 β 、 γ 、 δ 和ε 。 δ具有3‘-5’核酸外切酶的活性。Po