DNA重组技术的基本工具4.ppt

B B A C C F D E 复习1：原核细胞的基因结构 复习２：真核细胞的基因结构 B B A C F D E 　Ｇ 　Ｈ 原核细胞的基因结构 IMN 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 与RNA聚合酶结合位点 启动子 终止子 编码区 非编码区 编码蛋白质 ,连续不间断 不编码蛋白质，有调控作用 真核细胞的基因结构 编码区 非编码区 外显子：能编码蛋白质的序列 内含子：不能编码蛋白质的序列 不编码蛋白质，有调控作用 编码区 非编码区 非编码区 启动子 终止子 编码区上游 编码区下游 外显子 内含子 与RNA聚合酶 结合位点 IMN 一 目的基因的获取 第二节　 基因工程的基本操作程序 IMN (一)目的基因： 编码蛋白质的结构基因； (二)获取目的基因的常用方法 从自然界已有的物种中分离 用人工的方法合成 1. 从基因文库中获取目的基因 (1)基因文库的概念 将含有某种生物不同基因的许多DNA片段,导入 受体菌的群体中储存,各个受体菌分别含有这种 生物的不同的基因,称为基因文库。 (2)基因文库的类型 基因组文库和部分基因文库 (3)基因文库的构建 析1 反转录法 mRNA cDNA (互补DNA) 双链DNA 反转录酶 DNA聚合酶 析2 如何从基因文库 中得到所需要的基因 依据目的基因的有关信息 IMN (1) PCR——聚合酶链式反应 是一项生物体外复制特定DNA片段的核酸合成 技术。通过此技术，可在短时间内获取大量的 目的基因。 2. 利用PCR技术扩增目的基因 模板DNA；合成引物； 四种脱氧核苷酸；DNA聚合酶等。 (2)原理： DNA双链复制 (3)前提： 一段已知目的基因的核苷酸序列 (4)条件： (5) 过程： 变性、退火、延伸三步曲 (6)结果： 以指数形式扩增 变性 退火 延伸 3. 通过DNA合成仪用化学的方法直接人工合成 若基因_____，核苷酸序列______ 。 较小 已知 1.作用 ①使目的基因在受体细胞中稳定存在并遗传给 子代 ②同时使目的基因能表达和发挥作用 二 基因表达载体的构建——核心 IMN 目的基因 2.组成 启动子 终止子 标记基因 三 将目的基因导入受体细胞 （一）转化： 目的基因进入_________内，并且在受体细胞内维持_____和_____的过程 受体细胞 稳定 表达 （二）方法： 1.将目的基因导入微生物细胞 3）常用法： 2）常用菌： 1）微生物作受体细胞原因： 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少 4）过程： Ca2+处理 大肠杆菌 感受态 细胞 表达载体 与感受态 细胞混合 感受态细胞 吸收DNA 大肠杆菌 Ca2+处理 2.将目的基因导入植物细胞 1）农杆菌转化法 ①特点: ②过程： 能感染双子叶植物和祼子植物,对单子叶植物无 感染能力 Ti质粒的T—DNA可转移至受体细胞并整合到其染色体上 提纯含目的基 因表达载体 取受精卵 显微注射 培养成早期胚胎 发育成新性状动物 3.将目的基因导入动物细胞——显微注射技术 1）细胞类型： 2）操作程序: 移植到子宫或输卵管 导入过程完成后，全部受体细胞都能摄入重组 DNA分子吗？ 四 目的基因的检测与鉴定——检查是否成功 真正能摄入重组DNA分子的受体细胞很少。 目的基因进入受体细胞后，是否都能稳定维持 和表达？ 不一定 受精卵