cc课题3分解纤维素的微生物的分离25张PPT.ppt

made by cc made by cc 课题背景 植物的根、茎、叶等器官都含有大量的纤维素。 每年地球上植物能产生70亿吨 纤维素。 其中，40-60%被土壤中的微生物分解。 讨论：食草动物是怎样消化食物中纤维素的？ 在草食性动物等的消化道内，也共生有分解纤维素的微生物，其原理也是产生纤维素酶而分解纤维素。 纤维素生物燃料： 最有希望替代石油的能源 科学家正致力于研究，怎样将农业废弃物，木材及生长更为迅速的草本植物，转化为种类繁多的生物燃料（甚至是航空燃料）。 纤维素： 棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物。 纤维素能被土壤中微生物分解利用，这是因为他们能够产生纤维素酶 基础知识 1.纤维素 纤维素是以一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物，是地球上含量最丰富的多糖类物质。 2.纤维素酶 纤维素酶是一种复合酶，一般认为至少包括三组分，即C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶 （一）纤维素和纤维素酶 纤维二糖 C1酶、Cx酶 葡萄糖苷酶 葡萄糖 纤维素 ①取二支20mL的试管 小实验：纤维素酶分解纤维素的实验 ②各加入一张滤纸条 ③分别加入pH4.8，物质量为0.1mol/L的醋酸－醋酸钠缓冲液11ml和10ml 甲 乙 ④在乙试管中加入1mL纤维素酶 ⑤两支试管固定在锥形瓶中，放在 140r/min的摇床上振荡1h ⑥结果：乙试管的滤纸条消失 讨论：乙试管的滤纸条为什么会消失？ 甲试管的作用是什么？ 本实验的自变量是纤维素酶的有无。 自变量的设置是：在一支试管中添加适量（1mL）的纤维素酶溶液，在另一支试管不添加纤维素酶，但需加入等量的缓冲液，不能加入蒸馏水，否则会影响溶液的pH。 实验分析：P27的小实验中的自变量是什么？ 1.方法： 刚果红（Congo Red，简称CR）染色法 该方法通过颜色反应直接筛选。 2.原理： 刚果红可以与纤维素形成______________,当纤维素被____________分解后，红色复合物无法形成，出现以纤维素分解菌为中心的___________,可以通过_______________________来筛选纤维素分解菌。 红色复合物 纤维素酶 透明圈 是否产生透明圈 2.纤维素分解菌的筛选方法的原理 即：可根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。 （二）纤维素分解菌的筛选 纤维素 刚果红 红色复合物 纤维素分解菌 纤维素酶 红色消失， 出现透明圈 空白的 刚果红培养基 纤维素分解菌在刚果红培养基上形成的透明带。 从功能上看，这是一种什么培养基？ 鉴别培养基 刚果红可以与纤维素形成红色复合物,但并不与纤维素降解产物纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。 研究人员在刚果红培养基平板上,筛到了几株有透明降解圈的菌落(见下图)。图中降解圈大小与纤维素酶的 有关。 图中降解纤维素能力最强的菌株是 (填图中序号)。 【典型例题】 量与活性 ① 有透明降解菌说明纤维素被纤维素酶催化降解，则降解圈大小与纤维素酶的量与活性有关。降解圈越大，说明降解纤维素能力最强。 【方法点拨】 二、实验设计 土壤取样 选择培养 梯度稀释 鉴别 培养 挑选菌落 1.应在什么样的环境取样?依据是什么？ 2.如果土壤中纤维素含量不够丰富，应该怎么办？ 根据：微生物对生存环境的要求，到相应环境中去找； 二、实验设计 土壤取样 选择培养 梯度稀释 鉴别 培养 挑选菌落 1.该培养基的物理性质？ 2.该培养基是否有选择作用？ 3.培养的目的? 4.你能否设计一个对照实验，说明选择培养的作用？ 目的：增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离到所需要的微生物； 选择培养 ①右边的配方是液体培养基还是固体培养基？为什么？ ②这个培养基对微生物是否具有选择作用？如果具有，是如何进行选择的？ ③你能否设计一个对照实验，说明选择培养基的作用 液体培养基，原因是配方中无凝固剂（琼脂） 有选择作用，本配方中的主要碳源是纤维素（粉），所以能分解纤维素的微生物可以大量繁殖。 自变量为培养基的种类，即普通培养基和选择培养基。 可用牛肉膏蛋白胨培养基与之对照,或者将纤维素改为葡萄糖。 为什么选择培养能够“浓缩”所需的微生物？ 在选择培养的条件下，可以使那些能够适应这种营养条件的微生物得到迅速繁殖，而那些不适应这种营养条件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“浓缩”的作用。 比较项目 分解尿素的细菌 纤维素分解菌 选 择 培养 基 原理 培养基类型 目的 将细菌涂布在只有 尿素做氮源的选择 培养基上。 将细菌涂布在只有 纤维素粉做碳源的 选择培养基上。 固体培养基 液体培养基 筛选菌株 选择培养 课后比较：本实验的流程与课题2中的实验流程有哪些异同？ 二、实验设计 土壤取样 选择培养