农药残留详细操作细则.docVIP

农药残留详细操作细则 此细则主要依据国家标准《GB-T 5009.199-2003 蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量快速检测》来定制的。 本实验室主要使用“酶抑制率法（分光光度法）”来对蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留进行快速检测。 试验主要仪器?DT103农药残留快速测试仪 ??? ??? 1、开机??????? 插上电源，打开仪器背面绿色电源开关，仪器显示开机画面，按画面提示操作，按下回车键，仪器开始自检，时间约1min。自检完毕后，仪器进入待机检测状态。??????2、试剂配制（配套试剂：AB204农残速测试剂）??????2.1、缓冲液：取1包缓冲剂加入500mL蒸馏水或纯净水中，搅拌溶解制成磷酸缓冲液（pH7.6）, 常温保存。??????2.2、显色剂：取1瓶显色剂加25mL缓冲液溶解，使用时取100μL，4冰箱保存。??????2.3、底?物：取1瓶底物加12.5mL蒸馏水或纯净水溶解，使用时取100μL，4冰箱保存；????????????????????? 或取1瓶底物加2.5mL蒸馏水或纯净水溶解 ，使用时取20μL，4冰箱保存。??????2.4、?胆碱酯酶：酶制剂无需配制，可直接取用，使用时取100μL，4冰箱保存。??????3、预贴标签 根据控制中心下达的标签已经到火车达时间，可以现在烧瓶上贴上相应的标签。 4、样品提取???????取2g果蔬样品（块茎类取4g)，叶菜剪成1cm左右见方的碎片，块茎类取横截面样品或取其表皮，放入三角瓶中加入10mL缓冲液，振荡1～2min ，倒出提取液，静置2min，待测。若提取液混浊或杂质太多可过滤后再测。??????5、测试??????.1、?对照测试：于反应瓶中加入2.5mL缓冲液，再分别加入100μL酶液和显色剂，混匀，静置反应10min样品测试：于反应瓶中加入2.5mL待测液，再分别加入100μL酶液和显色剂，混匀，静置反应10min后加入100μL（或20μL）底物，摇匀并立即倒入比色杯中，合上盖。按〈B〉键，显示屏下方延迟10s后，测量时间开始倒计时，计时完毕，显示屏显示吸光度增量(ΔΑ0)及抑制率。按〈M〉键，显示屏显示吸光度增量（ΔΑt)及抑制率。数据自动保存，如有需要按〈P〉键打印。若样品抑制率≥50%，表示样品农残超标，为阳性结果。附加说明：??????? 1、葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中，含有对酶有影响的植物次生物质，容易产生假阳性。处理这类样品时，可采取整株（体）蔬菜浸提或采用表面测定法。对一些含叶绿素较高的蔬菜，也可采取整株（体）蔬菜浸提的方法，减少色素的干扰。??????? 2、当温度条件低于37，酶反应的速度随之放慢，药片加液后放置反应的时间应相对延长，延长时间的确定，应以空白对照卡用手指（体温）捏3min时可以 变蓝，即可往下操作。注意样品放置的时间应与空白对照卡放置的时间一致才有可比性。空白对照卡不变色的原因：一是药片表面缓冲溶液加的少、预反应后的药片 表面不够湿润，二是温度太低。需进行适当的保温。注意事项 ?????? 酶活性要求：本试剂盒中酶试剂正常活性ΔΑ0≥0.3，符合GB/T 5009.199-2003方法的要求。??????? 保存：试剂盒应保存4冰箱，保质期12个月。 ?????? 使用：任何试剂使用时，用一瓶打开一瓶，用完后才使用新的，防止变质。 ?????? 器具专用原则：任何用于移液的器具和容器都应各自贴上标签，单独使用，以免交叉污染。??????? 试剂只出不入原则：测试时，从任何试剂瓶吸出的试剂，禁止再次注射回试剂瓶。??????? 环境温度对测试的影响：当环境温度过低时（一般低于20）,测试时需作必要保温措施。?????? 常温方法：本试剂可用常温方法测试，测试时试剂室温放置10min，测试1min的吸光度变化值ΔΑ0。正常活性ΔΑ0在0.15~0.3之间。农药速测卡国家标准方法（GB/T5009.199-2003）一、整体测定法 ?????? 1、选取有代表性的蔬菜样品，擦去表面泥土，剪成1cm左右见方碎片，取5g放入带盖瓶中，加入10mL纯净水或缓冲溶液，震摇50次，静置2min以上。?????? 2、取一片速测卡，撕去上盖膜，用白色药片沾取提取液，放置10min以上进行预反应，有条件时，在37恒温装置中放置10min。预反应后的药片表面必须保持湿润。 ?????? 3、将速测卡对折，用手捏3min或用恒温装置恒温3min，使红色药片与白色药片叠合发生反应。根据白色药品的颜色变化判读结果。??????? 4、每批测定应设一个纯净水或缓冲液的空白对照卡。二、表面测定法（粗筛法）???? ???1、擦去蔬菜表面