人教版生物选修15、1DNA的粗提取与鉴定课件共22张PPT.ppt

5.1 DNA和蛋白质技术 1.DNA的粗提取与鉴定 2.多聚酶链式反应扩增DNA片段 3.血红蛋白的提取和分离 DNA和蛋白质技术 课题1　DNA的粗提取与鉴定 1，了解DNA的物理和化学性质 2，理解DNA粗提取和DNA鉴定的原理(重点） 3，尝试粗提取植物和动物组织中的DNA（难点） 利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。 一．基本思路 分离原理 不同浓度NaCl中DNA溶解度不同 二. 实验原理 溶解规律 2 mol/L NaCl溶液 0.14 mol/L NaCl溶液 DNA 溶解 析出 蛋白质 NaCl溶液浓度从2 mol/L降低的过程中，蛋白质溶解度逐渐增大 部分发生 盐析沉淀 溶解 总结 ①DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同。在NaCl溶液浓度低于0.14 mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低；在0.14 mol/L时，DNA溶解度最小；当NaCl溶液浓度继续增加时，DNA的溶解度又逐渐增大 ②选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离的目的 （1）.DNA不溶于酒精，细胞中某些蛋白质则溶于酒精。 （2）.酶的专一性——蛋白酶水解蛋白质，但对DNA没有影响。 2，提纯原理 (3).蛋白质、DNA热稳定性不同。大多数蛋白质不能忍受60-80℃的高温，而DNA在80 ℃以上才会变性。 (4).洗涤剂：能瓦解细胞膜，对DNA无影响。 3,DNA鉴定原理 在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺被染成蓝色。 三．实验设计 1.实验材料的选取 选取DNA含量相对较高的生物材料，如鸡血细胞。 本实验不能用哺乳动物成熟红细胞作实验材料，原因是哺乳动物成熟红细胞无细胞核。可选用鸡血细胞作材料。 2.破碎细胞，获取含DNA滤液 动物细胞（鸡血细胞）加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃杯搅拌，使其吸水涨破，过滤后收集滤液即可； 植物细胞需用洗涤剂瓦解细胞膜。如：提取洋葱的时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行充分地搅拌和研磨，过滤后收集研磨液。 3. 去除滤液中的杂质 酒精 静置 白色丝状物 玻璃棒 卷起丝状物 照实验 丝状物 对 的量浓度为2 mol/L 物质 二苯胺 在沸水中加热5 min 变蓝 4. DNA析出与鉴定 为2 mol/L 物质的量浓度 四. 实验注意事项 1.以血液为实验材料时，需在血液中加入柠檬酸钠防止凝固。 2.用洗涤剂处理植物细胞时动作要轻缓 ，防止产生大量泡沫 。加入酒精后用玻璃杯搅拌动作要轻缓，防止DNA分子断裂 ，不能形成絮状沉淀。 3.鉴定DNA用的二苯胺试剂要现配现用 ，否则影响实验效果。 1、DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，在0.14mol/L的NaCl溶液中溶解度最低( ) 2、DNA不溶于冷酒精，可用酒精进一步提取DNA( ) 3、DNA与二苯胺溶液反应生成紫色物质( ) 4、酵母和菜花均可作为提取DNA的材料( ) 5、向鸡血细胞液中加蒸馏水搅拌，可见玻棒上有白色絮状物( ) 6、DNA溶液加入二苯胺试剂沸水浴加热，冷却后变蓝( ) √ √ × √ √ × 课堂练习 7、(2015·江苏改编)图1、2分别为“DNA的粗提取与鉴定”实验中部分操作步骤示意图，下列叙述不正确的是 A．图1、2中加入蒸馏水稀释的目的相同 B．图1中完成过滤之后保留滤液 C．图2中完成过滤之后弃去滤液 D．在图1鸡血细胞液中加入少许嫩肉粉有助于去除杂质 解析：图1中加入蒸馏水的目的是使鸡血细胞吸水涨破，释放其中的核物质，图2中加入蒸馏水的目的是降低NaCl的浓度，使DNA的溶解度降低析出，A错误；由于DNA溶于水，所以图1中完成过滤后DNA存在于滤液中，需保留滤液，B正确；图2中DNA析出，则过滤后弃去滤液，保留黏稠物，C正确；在图1中鸡血细胞液中加入少许嫩肉粉，蛋白质水解形成肽和氨基酸，溶于水，有利于去除杂质，D正确。 答案：A DNA粗提取操作中4次过滤的比较 8、“DNA的粗提取与鉴定”实验中，操作正确的是 A．取制备好的鸡血细胞液5～10 mL注入烧杯中，迅速加入物质的量浓度为0.14 mol/L的NaCl溶液20 mL，同时用玻璃棒沿同一方向快速搅拌5 min，可使血细胞破裂，释放出DNA B．整个DNA提取过程中，两次加蒸馏水的目的都是为了降低溶液中NaCl的浓度，使DNA分子的溶解度达到最低，析出DNA分子 C．整个DNA提取操作中，两次加入2 mol/L的NaCl溶液，目的都是使DNA尽可能多地溶解在NaCl溶液中