人教版选修1专题五课题1DNA粗提取与鉴定共18张PPT1.ppt

⑴过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液 目的:获得含核物质的滤液 ⑵过滤含粘稠物的0.14mol/LNaCl溶液 目的:获取纱布上的粘稠物 ⑶过滤溶解有DNA的2mol/LNaCl溶液 目的:得到含DNA的滤液 第一次搅拌加蒸馏水的鸡血细胞液 加速细胞的破裂 第二次搅拌加2mol/LNaCl溶液的滤液 使DNA与溶液混合均匀 第三次搅拌加蒸馏水至0.14mol/LNaCl溶液 稀释NaCl溶液,析出DNA 第四次搅拌放入2mol/LNaCl溶液中纱布上的粘稠物 使DNA尽可能多的溶于溶液中 第五次搅拌体积分数为95%的酒精 提取含杂质较少的DNA * 选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。对于DNA的粗提取而言．就是要利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。 提取DNA的方法 一、提取生物大分子的基本思路 DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同。 二、DNA的溶解性 溶解度 NaCl浓度 0.14mol/L 曲线解读： 1、在NaCl溶液浓度低于0.14 mol/L时，DNA的溶解 度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低； 2、在0.14 mol/L时，DNA溶解度最小； 3、当NaCl溶液浓度继续增加时，DNA的溶解度又 逐渐增大。 利用该特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离的目的。 DNA不溶于酒精，但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步地分离。 以鸡血为实验材料进行DNA的粗提取 案例一： 本实验用鸡血细胞做实验材料有两个原因： 一是因为鸡血细胞核的DNA含量丰富，材料易得； 二是鸡血细胞极易吸水胀破，而用动物肝脏细胞作实验材料常常需要匀浆和离心，对设备要求较高，操作繁琐，历时较长。 为什么用鸡血细胞做实验材料？ 能否选用牛、羊、马血做实验材料？为什么？ 不能。因为哺乳动物成熟的红细胞中无细胞核，仅靠白细胞和淋巴细胞中的少数DNA，在实验中很难提取到。 1、制备鸡血细胞液 2、破碎细胞，释放DNA 3、溶解细胞核内的DNA 4、DNA的析出——提取 5、DNA的初步纯化——提纯 6、DNA的鉴定 提取DNA的具体步骤 1、制备鸡血细胞液 取质量浓度为0.1 g/mL的柠檬酸钠溶液100 mL，置于500 mL烧杯中，注入新鲜的鸡血（约180 mL），同时用玻璃棒搅拌，使血液与柠檬酸钠溶液充分混合，以免血液凝结。将烧杯中的血液置于冰箱内，静置1d，使血细胞自行沉淀。用吸管除去上部的澄清液，就可以得到鸡血细胞液。 柠檬酸钠可防止血液凝固 2、破碎细胞，释放DNA 向鸡血细胞液中加入蒸馏水，并且搅拌，从而使血细胞膜和核膜胀破。用玻璃棒搅拌可以加速细胞的破裂。注意应沿一个方向快速搅拌，但也不能太快太猛，防止打碎DNA。 释放出来的大量DNA和RNA往往与蛋白质结合在一起，应用3～4层纱布进行过滤，除去一些颗粒较大的杂质。 蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂)，从而释放出DNA。 此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？ 可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质。 3、溶解细胞核内的DNA 在浓度较高的NaCl溶液中核蛋白容易解聚，游离出的DNA溶解在溶液中。在溶液中加入两倍体积的浓度为2 mol/L的NaCl溶液，搅拌1 min。注意应沿一个方向搅拌，使DNA充分溶解。 如果使用植物材料，必须研磨充分。 研磨不充分会使细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等。 4、DNA的析出——提取 将溶液中的DNA与其他杂质分离，这一步骤是实验成败的关键。 加蒸馏水降低NaCl溶液浓度，使DNA析出。 实验中应该缓慢贴壁加入蒸馏水，并轻轻地沿一个方向不停地均匀搅拌，以利于DNA分子的附着和缠绕。同时应注意控制加水量，使NaCl溶液的始终浓度为0.1～0.2 mol/L。加水太多、溶液过稀，会使DNA分子又重新溶解。 为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？ 1、用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐中不能溶解的杂质； 2、用低盐浓度使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。 因此，通过反复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不同的多