人教版选修3专题1第二节基因工程的基本操作程序共44张PPT1.ppt

1.2基因工程的基本操作程序 1、目的基因的获取； 2、基因表达载体的构建； 3、将目的基因导入受体细胞； 4、目的基因的检测与鉴定； 一、目的基因的获取 二、基因表达载体的构建——核心 二、基因表达载体的构建——核心 基因表达载体组成： 有目的基因、启动子、 终止子和标记基因等。 （1） 生物之间进行基因交流，只有使用受体生物自身基因的启动子才能比较有利于基因的表达 （2） 通过cDNA文库获得的目的基因没有启动子，只将编码序列导入受体生物中无法转录； （3） 目的基因是否导入受体生物中需要有筛选标记； 三、将目的基因导入受体细胞—转化 常用的受体细胞： 有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。 1、检测法：DNA分子杂交 如果显示出杂交带，就表明待测样品含有目的基因或目的基因已经转录。 DNA分子杂交技术 分子探针：核酸分子探针是指特定的已知核酸片段（目的基因片段），能与互补核酸序列退火杂交，用于对待测核酸样品中特定基因顺序的探测。 满足条件： （1）必须是单链； （2）带有容易被检测出来的标记物（如放射性同位素标记）。 核酸分子杂交实质上是用已知序列的DNA或RNA片段作为探针与待测样品的DNA或RNA序列进行核酸分子杂交。 四、目的基因的检测与鉴定 2、鉴定：（个体水平） 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 四、目的基因的检测与鉴定 将每个受体细胞单独培养形成菌落，检测菌落中是否有目的基因的表达产物。淘汰无表达产物的菌落，保留有表达产物的进一步培养、研究。 （3）花粉通道法 植物花粉在柱头上萌发后，花粉管要穿过花柱直通胚囊。花粉管通道法就是在植物受粉后，花粉形成的花粉管还未愈合前，剪去柱头，然后，滴加DNA（含目的基因），使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞。 我国转基因抗虫棉就是用这种方法获得 2、将目的基因导入动物细胞 ①方法：显微注射法 ②程序： 目的基因表达载体提纯 取卵（受精卵） 显微注射 受精卵 新性状动物 3、将目的基因导入微生物细胞 常用法：Ca2+处理 常用菌：大肠杆菌 微生物作受体细胞原因： 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少 过程： Ca2+处理大肠杆菌 感受态细胞 表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA 培养 培养 培养 导入 含目的基因的重组质粒导入大肠杆菌 含有氨苄青霉素 的完全培养基 含有四环素的完全培养基 两种培养基均不能生长大肠杆菌 Ca2+ 处理细胞形成感受态细胞 检测 （培养不具有氨苄青霉素 抗性基因和四环素抗性基因的大肠杆菌） 只有氨苄青霉素抗性基因质粒 只具有氨苄青霉素抗性基因大肠杆菌 不具有氨苄青霉素 抗性基因和四环素抗性积基因的大肠杆菌 完全培养基 导入 接种培养 接种培养 接种培养 接种培养 含有四环素的完全培养基 完全培养基 大肠杆菌不含抗四环素基因 证明： 不存活 含有四环素的完全培养基 证明： 大肠杆菌含抗四环素基因 证明： 大肠杆菌的受体细胞含有目的基因 四环素抗性基因 四环素抗性基因 完全培养基 存活 如何把导入了目的基因的受体细胞筛选出来？ 三、将目的基因导入受体细胞 1.将目的基因导入植物细胞 转化 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 2.将目的基因导入动物细胞 显微注射技术 3.将目的基因导入微生物细胞 Ca2+处理 包括做抗虫，抗病的接种实验，以确定是否有抗性以及抗性的程度；对基因工程产品与天然产品的功能进行活性比较，以确定功能是否相同。 个体水平鉴定 是否显示杂交带 抗原—抗体杂交 目的基因是否翻译出蛋白质 第三步 是否显示杂交带 DNA与mRNA分子杂交 目的基因是否转录出mRNA 第二步 是否显示杂交带 DNA分子杂交 目的基因是否插入受体细胞DNA 第一步 分子 水平 检测 结果显示 方法 检测内容 步骤 类型 四、目的基因的检测与鉴定 无表达产物 无表达产物 有表达产物 无表达产物 * 1.2 基因工程的基本操作程序 乐安一中 黄友元 彩色棉种子中引入了抗虫害基因，因此种植过程中基本不使用农药。后期产品加工过程中也很少需要使用辅助的化学品。因此，彩色棉是真正意义上的“绿色产品”。 该技术将异源染色体小片段整合到受体染色体，获得了耐盐、优质、高产杂种小麦。 基因工程：按照人们的意愿，进行严格设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。