免疫细胞分离和保存技术.pptVIP

第二十章 免疫细胞的分离和保存技术 何印蕾 * 概述 临床上的各种类型的免疫缺陷、自身免疫病以及肿瘤等疾病均可出现淋巴细胞或淋巴亚群的数量和功能的变化。因此用体外方法对机体具有免疫反应的外周血淋巴细胞及其亚群的数目或比例以及它们所显示的功能的强弱进行检测，是判断机体细胞免疫水平的一种重要手段。这对于临床认识疾病、探讨其发病机制、观察病情变化、判断预后、考核疗效和防治疾病等方面均有重要意义。 * 第一节 免疫细胞的分离 用体外方法对机体各种具有免疫反应的细胞分别作鉴定、计数和功能测定，是观察机体免疫状态的一种重要手段。为此，须将各种参与免疫反应的细胞从血液中分离出来。参与免疫的细胞主要包括：淋巴细胞、巨噬细胞、中性粒细胞等。 * 一、白细胞的分离 血液中红细胞与白细胞比例约为600~1000：1，两者的比重不同其沉降速度也不同，通常用两种方法加以分离。 1、自然沉降法 外周血， 抗凝，静置约一小时血液分为三层，上层为血浆，底层为红细胞，紧贴红细胞层上面的灰白层为WBC，轻轻吸取此层即可得到富含WBC悬液，低渗破坏RBC，洗涤即可。 * 2、聚合物加速沉淀法 常利用高分子量的聚合物如明胶、右旋糖酐等，将红细胞快速沉降，从而分离出白细胞。本法的细胞获得率比自然沉降法高。 * 二、外周血单个核细胞的分离 人血液中各种细胞的密度如下： 红细胞：1.093