第20讲分离以尿素为氮源的微生物.pptx

2016年10月选考题32.【加试题】(7分)请回答从土壤中分离产脲酶细菌和脲酶固定化实验的有关问题（1）LB固体培养基：取适量的蛋白胨、酵母提取物、NaCl，加入一定量的蒸馏水溶解，再加 ，灭菌备用。（2）尿素固体培养基：先将适宜浓度的尿素溶液,用 灭菌过的G6玻璃砂漏斗过滤，因为G6玻璃砂漏斗 ，故用于过滤细菌。然后将尿素溶液加入到已经灭菌的含有酚红的培养基中，备用。（3）取适量含产脲酶细菌的10-4、10-5两种土壤稀释液，分别涂布接种到LB固体培养基和尿素固体培养基上，培养48h，推测固体培养基上生长的菌落数最少的是 (A. 10-5稀释液+尿素固体培养基 B. 10-5稀释液+LB固体培养基 C. 10-4稀释液+尿素固体培养基 D. 10-4稀释液+LB固体培养基)。在尿素固体培养基上产脲酶细菌菌落周围出现 ，其原因是细菌产生的脲酶催化尿素分解产生 所致。（4）制备固定化脲酶时，用石英砂吸附脲酶，装柱。再用蒸馏水洗涤固定化酶柱，其作用是 。琼脂 高压蒸汽 孔径小，细菌不能滤过 A 红色环带 氨(或NH3) 除去游离的脲酶实验2 分离以尿素为氮源的微生物一、实验原理菌种特点：含有______，可以通过降解_____（又称为___）作为其生长的氮源。反应方程式为2. 培养基：以_______为唯一_______的培养基培养，以___________为对照。3. 分离的方法：_____________，获得的菌落，通常以每个培养皿中含有____个以内的单菌落最为合适。脲酶尿素脲尿素氮源LB全营养培养基涂布分离法20含有脲酶的细菌利用了所形成的氨，有利于自然界中氮的循环。（有脲酶的细菌在生态稳态上的作用）大量的尿素的存在会对环境有怎样影响？如果土壤中有许多尿素，在自然界较高温度下会被水解成氨，氨使土壤碱化，氨还与SO42-等离子形成化合物，使土壤板结。（二）实验步骤１. LB全营养固体培养基和尿素固体培养基的配制与灭菌（课本26页）（1）配制尿素培养基（实验组） 葡萄糖0.025g NaCl 0.12g K2HPO4 0.12g 琼脂糖0.5g 酚红0.25g 尿素 10ml 水LB全营养固体培养基（对照组） 蛋白胨： 0.25g 酵母提取液： 0.12g NaCl： 0.25g 琼脂： 0.5g 水 因为琼脂是未被纯化的混合物，内含一定量的含氮化合物。如果用琼脂固化培养基，会为细菌提供一定量的非尿素类氮源，这样会在尿素固体培养上产生大量以非尿素为氮源的细菌，不利于以尿素为氮源的细菌的筛选，故用纯化的琼脂糖而不用琼脂做固化剂为什么用琼脂糖代替琼脂？（三）实验步骤１. LB全营养固体培养基和尿素固体培养基的配制与灭菌（课本26页）２.倒平板３.制备一定浓度梯度的土壤稀释液（细菌悬液）取样时，尽量只取悬液（三）实验步骤１. LB全营养固体培养基和尿素固体培养基的配制与灭菌（课本26页）２.倒平板３.制备一定浓度梯度的土壤稀释液（细菌悬液）取样时，尽量只取悬液４.稀释涂布分离法分离细菌（无菌，0.1ml，玻璃刮刀）５.培养观察（倒置，37℃ 24-48h）LB全营养培养基：菌落多而复杂观察现象尿素培养基：菌落少，单一，菌落周围出现红色区域考点诊断下列关于以尿素为氮源微生物培养与分离的相关叙述正确的是(　)①对尿素溶液进行灭菌的最适方法是紫外灯照射灭菌(12·浙江改编)②培养基分装到培养皿后进行灭菌(13·江苏)③取单菌落适当稀释,用划线分离法接种于固体培养基表面,在37 ℃培养箱中培养24 h,使其均匀生长,布满平板(13·全国Ⅱ)④细菌培养实验中进行计数时,应计数的是接种了各个稀释度样品的培养基上的菌落数(14·浙江)⑤可以采用涂布分离法来测定活菌数量(15·全国改编)⑥从土壤中筛选产脲酶细菌,使用的选择培养基应以尿素为唯一氮源(16·四川改编)答案:⑤⑥(2014·台州温岭中学测试)下图是“分离以尿素为氮源的微生物”实验的基本流程，请回答以下问题：(1)A过程配制的培养基有_____________和_______________。配制过程中要用________作为培养基的凝固剂，其目的是为了__________________________。B过程尿素溶液用____________________使之无菌。该实验选用的是涂布分离法，而非划线分离法的好处是________________。(2)有关E、F过程，下列实验操作中不正确的是(　)A. 将土壤用无菌水进行一系列的梯度稀释B. 同一浓度的土壤稀释液应至少涂布三个平板C. 可将未接种的培养基在相同条件下培养作为对照D. 用加入刚果红指示剂的培养基可筛选出能分解尿素的细菌(3)该实验的结果：A同学从培养基中筛选出大约1